猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王垚

作者： 王垚;金前跃;周稳;李旭锋;柴永笑;丁培阳;陈晓;邢云瑞;李艳华;郭军庆;张改平

作者机构：

关键词： 猪伪狂犬病毒;gE蛋白;毕赤酵母;单克隆抗体

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2019 年 010 期

页码： 133-139

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株.通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定.同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、效价测定及亚型鉴定.结果显示,PRV gE蛋白在毕赤酵母中成功表达,并获得了纯化蛋白,纯度达90%以上,且具有良好的生物学活性,与PRV阳性血清反应性良好;筛选到4株敏感性强、特异性良好的gE单克隆抗体,均可同时特异识别PRV gE蛋白及病毒,分别命名为2F10、4C10、9E1、10C3.综上,用酵母系统成功表达了PRV gE蛋白,并筛选到4株针对PRV gE蛋白的单克隆抗体.

分类号： S852.651

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