猪流行性腹泻病毒S1蛋白的真核表达及中和性单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李春震

作者： 李春震;李青梅;邹婉莹;孟泽锟;孙亚宁;杨苏珍;郭军庆;张改平

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒(PEDV);S1蛋白;单克隆抗体;中和活性;广谱反应性

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2025 年 52 卷 010 期

页码： 4854-4863

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]制备猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1重组蛋白及其中和性单克隆抗体,为PEDV诊断试剂和新型疫苗研发提供材料.[方法]构建可表达S1蛋白的重组质粒,转染HEK293F细胞,以镍亲和层析和凝胶过滤层析进行蛋白纯化.将PEDV CH/Hubei/2016毒株接种于Vero细胞进行培养增殖,对病毒液进行浓缩并利用凝胶过滤层析纯化PEDV,以SDS-PAGE及Western blotting对纯化的PEDV进行鉴定后免疫BALB/c小鼠以制备杂交瘤细胞;以间接ELISA及免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选阳性杂交瘤细胞,并通过病毒中和试验筛选鉴定抗PEDV S1蛋白中和性单克隆抗体.[结果]SDS-PAGE和Western blotting结果显示,S1重组蛋白在HEK293F细胞培养上清中高效表达.获得TCID50为1×10-6.5/0.1 mL纯化的PEDV.筛选获得5株稳定分泌抗PEDV S1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2E1E10、4A8C8、8G9B11、9H8H1和10C9A5,其腹水的 IPMA 和 ELISA 效价分别为 6.4×10-4 至 1.28×10-5 和 6.4×10-5至 1.024×10-7.病毒中和试验结果显示,单克隆抗体2E1E10和4A8C8对PEDV有显著中和活性,对DR13毒株的半数抑制浓度(IC50)分别为1.212和1.203 μg/mL,对CHHB毒株的IC50分别为0.948和1.712 μg/mL.[结论]本研究获得了具有良好抗原活性的PEDV S1重组蛋白和抗S1蛋白中和性单克隆抗体,为PEDV诊断试剂和疫苗研发奠定良好的研究基础.

分类号： S852.65+9.6

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