真核表达载体pcDNA3.1(+)-vp28的构建及其在细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 姜坤

作者： 姜坤;黄健;张峥;成君军;石正丽

作者机构：

关键词： WSSV;vp28;细胞转染;293T细胞

期刊名称： 安徽农业科学

ISSN： 0517-6611

年卷期： 2010 年 38 卷 22 期

页码： 11732-11734

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]为研究对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白与虾细胞之间的作用机制奠定基础。[方法]采用PCR扩增方法构建含白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28的真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-vp28,用磷酸钙共沉淀法将重组质粒转染到293T细胞中,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。[结果]VP28的PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中呈现出1条634bp左右的条带,与GenBank中vp28的序列完全一致。对pcDNA3.1(+)-vp28转染后的阳性单克隆菌落进行PCR鉴定、扩大培养和质粒提取,并对所得质粒进行HindⅢ和BamⅢ双酶切,获得了5409和610bp左右的2条带,与预期结果一致;所获扩增产物与vp28序列完全一致,说明重组质粒pcDNA3.1(+)-vp28被成功转染到293T细胞中;SDS-PAGE和Westernblot检测结果显示,pcDNA3.1(+)-vp28在293T细胞中的表达产物与预期结果相符。[结论]pcDNA3.1(+)-vp28在293T细胞中可成功表达VP28。

分类号： S945.1

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