流式细胞术检测供体猪α-1,3-Gal和人源CD46的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杜敏杰

作者： 杜敏杰;魏静;臧荣鑫;潘登科

作者机构：

关键词： α-1,3-半乳糖基转移酶;人源蛋白CD46;外周血单核细胞;流式细胞术

期刊名称： 实用器官移植电子杂志

ISSN： 2095-5332

年卷期： 2018 年 05 期

页码： 375-379

摘要： 目的检测基因修饰猪细胞表面α-1,3-半乳糖(α-Gal)抗原敲除情况和人源蛋白CD46(hCD46)的表达情况,为异种器官移植提供可靠的供体。方法采集500μl野生型(wild type,WT)、α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)、hCD46和GTKO/hCD46巴马小型猪血液,分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。异硫氰酸荧光素标记的植物凝集素(FITC-GSIB4)与PBMC共孵育后采用流式细胞术检测α-Gal抗原敲除情况,异硫氰酸荧光素标记的hCD46膜辅蛋白抗体(antiCD46-FITC)与PBMC共孵育后采用流式细胞术检测h CD46蛋白表达情况。结果 GTKO和GTKO/hCD46巴马猪PBMC表面α-Gal检测呈阴性,WT和hCD46巴马猪检测呈阳性,与测序结果一致;hCD46和GTKO/hCD46巴马猪PBMC表面hCD46蛋白检测呈阳性,WT和GTKO巴马猪检测呈阴性,与PCR鉴定结果一致。结论建立了微量血液流式细胞术直观检测供体猪α-Gal抗原和人源CD46蛋白表达的方法。

分类号： R617

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