一步法SYBR Green实时定量RT-PCR检测坦布苏病毒方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘青涛

作者： 刘青涛;李银;赵冬敏;刘宇卓;黄欣梅;杨婧;韩凯凯;安凤娇

作者机构：

关键词： 坦布苏病毒;实时定量RT-PCR;NS2A基因

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2015 年 04 期

页码： 829-833

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立快速检测坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)的一步法SYBR Green实时定量RT-PCR方法,本研究根据TMUV NS2A基因的保守序列,设计并合成了1对特异性引物,以体外转录的NS2A基因作为标准品,采用一步法实时定量RT-PCR方法检测TMUV。结果显示该方法标准曲线的决定系数为0.997,具有良好的线性关系;灵敏度为1μl 10拷贝,是常规RT-PCR方法的100倍;并且与其他病毒无交叉反应,批内和批间变异系数分别为0.11%~0.30%和0.88%~1.31%,具有良好的特异性和稳定性。该方法对于TMUV人工感染鸭泄殖腔棉拭子的检测阳性率为100%,而常规RT-PCR检测的阳性率只有71%。因此,本研究所建立的一步法实时定量RT-PCR方法灵敏度高、重复性、特异性好,可以用于TMUV的临床检测。

分类号： S852.65

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