旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ蛋白的制备及其定位研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵冰

作者： 赵冰;阿曼古丽·斯拉依;米荣升;程龙;刘旗;龚海燕;张烨华;贾海燕;韩先干;黄燕;陈兆国;赵权

作者机构： 吉林农业大学动物科学技术学院;中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物产品质量安全生物性危害因子风险评估实验室(上海)农业农村部动物寄生虫学重点实验室;伊犁哈萨克自治州动物疾病控制与诊断中心;华东师范大学生命科学学院上海市调控生物学重点实验室

关键词： 旋毛虫(T1);脱氧核糖核酸酶Ⅱ;原核表达;ELISA;定位

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年 31 卷 006 期

页码： 11-19

收录情况： 北大核心

摘要： 为获得旋毛虫(T1)脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNase Ⅱ)蛋白,观察其在肌幼虫虫体中的分布,以旋毛虫(T1)肌幼虫cDNA为模板,利用RT-PCR技术扩增旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ(TsDNase Ⅱ)蛋白的编码基因tsdnase Ⅱ,将其克隆到原核表达载体pCold-TF中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳分析;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot分析重组TsDNase Ⅱ(rTsDNase Ⅱ)蛋白的反应原性;将rTsDNase Ⅱ蛋白免疫6-8周BALB/c小鼠,制备其多克隆抗体;制作旋毛虫肌幼虫冰冻切片,利用免疫荧光试验观察TsDNase Ⅱ蛋白在虫体中的分布.结果,成功地扩增出了长度为942 bp的旋毛虫tsdnase Ⅱ基因片段,构建了其原核表达质粒pCold-TF-tsdnase Ⅱ;转化了重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)成功可溶表达了rTsDNase Ⅱ,大小为86 kDa;ELISA与Western blot分析结果显示,rTsDNase Ⅱ蛋白能与感染旋毛虫的小鼠血清发生特异性反应;冰冻切片免疫荧光分析显示,TsDNase Ⅱ分布于旋毛虫肌幼虫整个虫体.研究结果为进一步分析TsDNase Ⅱ的特性与功能、利用该蛋白研发旋毛虫病新型防控策略打下了基础.

分类号： S852.7

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