猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株VP1蛋白的原核表达及其反应原性

文献类型： 中文期刊

第一作者： 申识川

作者： 申识川;时洪艳;陈建飞;孙东波;吕茂杰

作者机构：

关键词： 猪捷申病毒;VP1基因;克隆;原核表达;纯化;免疫印迹

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2009 年 10 期

页码： 847-851

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株的基因组序列(GenBank登录号:DQ355222)设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了PTV的VP1基因片段,将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET-VP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子质量为45 ku的融合蛋白,在1.0 mmol/L IPTG诱导6 h后,重组菌的表达效果最好,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的63.4%,表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。表达产物经Ni柱纯化后,薄层扫描显示,目的蛋白的纯度达到了97%。Western-blot结果显示,纯化后的VP1蛋白能与PTV Swine/CH/IMH/03株阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,表明,原核表达的VP1蛋白具有良好的反应原性。

分类号： S852.659.6

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