猪CYP3A29基因核心启动子鉴定及转录调控分析
文献类型: 中文期刊
第一作者: 王红
作者: 王红;赵为民;程金花;李惠侠;方晓敏
作者机构:
关键词: 猪;CYP3A29;核心启动子;RUNX1;转录调控
期刊名称: 畜牧兽医学报
ISSN: 0366-6964
年卷期: 2025 年 56 卷 003 期
页码: 1147-1158
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 旨在鉴定猪CYP3A29基因核心启动子及相应的转录调控因子,分析转录因子对CYP3A29启动子活性的调控。本研究以3头健康的大白母猪(30 kg)为试验材料,利用PCR和Western blot检测CYP3A29基因在猪各组织(心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉)中的表达分布;构建不同片段长度的CYP3A29基因启动子双荧光素酶报告载体,转染293T和AML12细胞系,检测荧光素酶活性,确定CYP3A29基因的核心启动子区域;利用Animal TFDB网站分析CYP3A29核心启动子区域可能存在的转录调控因子,针对核心启动子区域构建分段缺失双荧光素酶报告载体,检测荧光素酶活性大小,确定转录因子结合位点;构建转录因子结合突变位点的双荧光素酶报告载体和转录因子shRNA载体,探讨转录因子对CYP3A29核心启动子的调控作用。结果显示,CYP3A29基因在猪肝脏中表达量最高;CYP3A29启动子4个不同检测区域(-2 026~+62 bp、-1 526~+62 bp、-1 026~+62 bp和-528~+62 bp)中-528~+62 bp活性最高,为CYP3A29核心启动子区;CYP3A29启动子-528~-448 bp区域负向调控核心启动子活性,且含有潜在的转录因子RUNX1结合位点;突变RUNX1结合位点可显著降低-528~+62 bp启动子的荧光素酶活性,而干扰RUNX1基因则显著升高-528~+62 bp野生型启动子的荧光素酶活性,但对-528~+62 bp突变型启动子的荧光素酶活性无显著影响,提示RUNX1转录因子可负向调控CYP3A29基因核心启动子活性。本研究结果为进一步解析猪CYP3A29基因的转录调控机制奠定了基础。
分类号: S828.2
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