H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白在原核系统中的表达

文献类型: 中文期刊

第一作者: 石锐

作者: 石锐;包红梅;姜永萍;乔传玲;陈化兰;王秀荣;陈维多

作者机构:

关键词: 禽流感;H9;原核表达

期刊名称: 东北农业大学学报

ISSN: 1005-9369

年卷期: 2011 年 42 卷 12 期

页码: 92-96

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 应用带有His6尾的pET原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,将禽流感A/Turkey/Wisconsin/66(H9N2)的HA基因克隆至原核表达载体pET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入,并且阅读框正确,获得重组质粒pET30a-H9。将此重组质粒转化到宿主菌BL21中,用诱导剂异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导,产物处理后进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹和薄层扫描分析。结果发现HA蛋白可被大量表达,主要以包涵体形式存在,表达产物分子质量约64 ku,与理论推测值一致;菌液OD600值为1.0、IPTG终浓度为0.3 mmol.L-1、诱导时间4 h,其蛋白表达量最大,约占菌体蛋白总量的35%左右;通过免疫印迹试验发现,表达的蛋白可被禽流感H9亚型阳性血清特异性识别。研究结果表明,可以用原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,其产物具有免疫原性,可以用作禽流感抗体检测的免疫诊断试剂。

分类号: S855.3

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