副溶血弧菌主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 万莹

作者： 万莹;凌娇;王权;孙卫东;蒋蔚

作者机构：

关键词： 副溶血弧菌;toxR;tdh;trh;三重荧光定量PCR

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 60-66

收录情况： 北大核心

摘要： 为建立快捷、准确、高效检测副溶血弧菌的方法,以副溶血弧菌种属特异性基因toxR和毒力因子tdh、trh基因序列,分别设计3对特异性引物及相应TaqMan探针,并在toxR、tdh和trh基因的3个探针的5'端分别标记FAM、HEX、CY5荧光报告基团,3'端标记BHQ1淬灭荧光基团,通过优化反应体系和反应参数,确定最佳反应体系,建立一种基于Taq Man探针定量检测副溶血弧菌的三重荧光定量PCR方法。结果:本试验所建立三重荧光定量PCR方法与其他菌株无交叉反应,其最低检出限达到了10 CFU/m L,重复性试验中每组变异系数均小于1%;检测人工染菌的虾肉和贝类样品时,最低检出限亦达到10 CFU/m L,且整个检测扩增时间大约为1 h。结果表明,本研究建立的三重荧光PCR检测方法,特异性强、敏感性高、重复性好且耗时短,是高通量检测致病性副溶血弧菌的有效手段。

分类号： S941.4

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