禽源多杀性巴氏杆菌重组外膜蛋白A间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 程龙飞

作者： 程龙飞;林群群;刘荣昌;陈翠腾;傅秋玲;傅光华;万春和;施少华;陈红梅;黄瑜

作者机构：

关键词： 多杀性巴氏杆菌;外膜蛋白A;原核表达;ELISA

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2017 年 37 卷 10 期

页码： 1886-1890

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立基于重组外膜蛋白A的检测禽源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA方法,扩增去除信号肽的外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)基因,定向克隆到载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-PmOmpA,转化至Escherichia coli BL21(DE3)以IPTG进行诱导,通过镍离子亲和层析纯化重组蛋白,进行SDS-PAGE和Westernblotting分析。以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA方法,方阵滴定法确定其最佳包被浓度和血清的最佳稀释度。结果,重组蛋白能与阳性血清发生良好的免疫反应。重组蛋白的包被浓度为4mg/L,血清的最佳稀释度为1∶80。SPF鸡的新城疫、鸡白痢和大肠杆菌病阳性血清,隔离饲养的番鸭鸭瘟、鸭病毒性肝炎和鸭疫里默氏菌病阳性血清,用该方法检测均为阴性。板内变异系数和板间变异系数均小于10%。ELISA方法的敏感性比直接凝集试验高出80倍以上。以重组外膜蛋白A建立的ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性,可以用于禽霍乱感染性抗体的检测,也可用于禽霍乱灭活苗和荚膜疫苗免疫效果的检测。

分类号： S852.61

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