高保真CRISPR/Cas9系统在家禽细胞中的编辑特性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 焦丹荣

作者： 焦丹荣;马梦雪;何柏水;谢龙;左二伟

作者机构：

关键词： 鸡;高保真编辑器;靶向;脱靶;ANP32B

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2024 年 40 卷 010 期

页码： 191-197

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]高保真编辑器有望大范围降低传统CRISPR/Cas9 系统在家禽基因编辑过程中发生的脱靶效应(off-target),但是其在家禽的应用目前仍然缺乏数据支持.为了评估高保真编辑器在家禽细胞中靶向(on-target)的编辑效果与脱靶特性,从而对家禽的分子遗传育种和种质资源利用提供有效参考.[方法]选取 5 种目前已被报道且具有较高精确性的高保真Cas9 变体,分别与设计的sgRNA共同对鸡的DF-1 细胞进行转染,收集阳性细胞进行基因测序,并对不同的高保真编辑器进行编辑效率与脱靶效应的平行对比.[结果]在针对禽流感抗性相关基因ANP32B和生殖相关基因DAZL的多个sgRNA测试中,eCas9 维持较高的编辑活性的同时表现出了较低的脱靶效应.同时,在检测的多种高保真变体中,SuperFiCas9 具有最低脱靶效应,但是在家禽DF-1细胞的基因编辑中会发生明显的编辑效率下降.[结论]多种高保真编辑器在家禽细胞内均展现编辑活性,其中eCas9 编辑器具有高效、低脱靶的特性,可作为鸡重要经济性状的遗传改良和分子育种工作的优选高保真编辑工具.

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