利用RNAi抑制cre1基因转录提高里氏木霉表达纤维素酶

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王榕

作者： 王榕;宫莉;姚斌;薛鲜丽;罗会颖;张永杰;苏小运

作者机构：

关键词： cre1;RNAi;纤维素酶;DNA assembler

期刊名称： 食品工业科技

ISSN： 1002-0306

年卷期： 2016 年 11 期

页码： 189-194

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究采用RNA干扰技术(RNAi)对里氏木霉主要的转录抑制因子cre1基因的表达进行抑制,以期提高里氏木霉生产纤维素酶的能力。通过PCR,从里氏木霉的基因组中扩增得到cbh1启动子、反向的cre1基因片段(568~963 bp)、正向的cre1基因片段(655~961 bp)和cbh2终止子,利用DNA assembler方法将这些基因连接到pRS424质粒上,构建成p Cre1-i质粒。再将RNAi盒分作两个片段扩增,同时转化里氏木霉并通过PCR鉴定阳性转化子。摇瓶发酵显示其中一株转化子在纤维素诱导培养基中培养4.5 d后,其纤维素酶的滤纸酶活、内切葡聚糖酶活和CBHI酶活为0.67、3.70和0.46 U/m L,较出发菌株分别提高了1.3、1.8和5.6倍。通过实时荧光RT-PCR检测,发现该转化子中cre1基因的转录水平比出发菌株降低了43%。

分类号： TQ920.1

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