弓形虫RH株CDPK1蛋白表达及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张曼玉

作者： 张曼玉;蒋蔚;陈芸;刘旗;段倩玉;耿小玲;王权

作者机构：

关键词： 弓形虫;CDPK1;原核表达;多克隆抗体;免疫保护

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2022 年 30 卷 003 期

页码： 181-188

收录情况： 北大核心

摘要： 为了研究刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)CDPK1的生物学功能,并深入了解其在免疫保护中所发挥的作用,本试验以弓形虫RH株cDNA为模板,表达CDPK1基因并鉴定其生物学功能.本研究将截短的CDPK1基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中后,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳分析;利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白,以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰兔,制备抗CDPK1多克隆抗体;通过蛋白质印迹技术(Western blot)及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定重组蛋白的免疫活性.结果显示:从弓形虫RH株cDNA中扩增出489bp截短的CDPK1基因片段,编码162个氨基酸,与GenBank中已知基因序列及氨基酸序列的同源性为100%;获得的重组蛋白CDPK1分子量约为44 kDa,且在37℃、180 rpm和IPTG浓度0.2mmol/L条件下,重组蛋白可获得高效可溶性表达;Western blot分析发现,重组蛋白能被GST标签抗体识别,不能被感染弓形虫的犬阳性血清识别,说明此重组蛋白不具有反应原性;IFA结果显示,重组蛋白的抗血清能够识别刚地弓形虫的天然蛋白CDPK1,说明重组蛋白CDPK1具有良好的免疫原性,且证实其主要位于刚地弓形虫虫体的细胞质和细胞核.本研究成功获得重组蛋白CDPK1及CDPK1多克隆抗体,为CDPK1特性与功能的研究奠定基础.

分类号： S858.26

  • 相关文献

[1]弓形虫RH株ROP18基因的原核表达及鉴定. 段倩玉,蒋蔚,陈芸,张曼玉,曹敬政,王权. 2020

[2]弓形虫SAG1单抗的研制及其初步应用. 蒋蔚,刘迎春,陈永军,安立刚,张花景,王权. 2013

[3]刚地弓形虫PTS核酸疫苗的构建及免疫保护力评价. 朱伟宁,王金磊,陈凯,黄思扬,朱兴全. 2017

[4]弓形虫SAGl单抗的研制及其初步应用. 蒋蔚,刘迎春,陈永军,安立刚,张花景,王权. 2013

[5]捻转血矛线虫Hc38保守结构域的表达及对绵羊的免疫保护试验. 赵军明,荣光,王新华,薄新文,钟发刚. 2008

[6]兔支气管败血波氏杆菌DNT蛋白的分段表达及其免疫保护性研究. 赵宁,王芳,恽时锋,范志宇,胡波. 2011

[7]副猪嗜血杆菌自转运三聚体VtaA1蛋白的表达及其免疫保护效力研究. 刘娇,崔宁,周泷,牛慧,张艳禾,李刚,谢芳,唐月敏,倪宏波. 2014

[8]副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白的表达及其免疫保护效力分析. 李大鹏,徐胜奎,刘双红,李刚,王春来. 2016

[9]刚地弓形虫组蛋白H2Bb及H2Bv的免疫保护作用. 周天缘,于正青,李纯静,王茗悦,刘军龙,罗建勋,徐立新,宋小凯,严若峰,李祥瑞. 2021

[10]禽腺病毒4型鞭毛重组蛋白的原核表达及其免疫效果研究. 刘超,侯磊,韦莉,王菁,全荣,朱珊珊,李子璇,齐宾宾,王利佳,姜海军,王丹,刘爵. 2017

[11]旋毛虫14-3-3蛋白的定位及免疫效果分析. 钱艳红,温肖会,宋帅,牛瑞辉,吕殿红,郑博彬,袁子国,罗胜军. 2025

[12]弓形虫胚层发育相关蛋白的原核表达及免疫原性研究. 田维鹏,张念章,高琦,鲁力,朱兴全,宋铭忻. 2014

[13]弓形虫profilin蛋白基因的克隆表达及序列分析. 高琦,张念章,胡玲英,朱兴全,翁亚彪. 2015

[14]弓形虫GRA1基因的原核表达与鉴定. 韩阳瑞,蒋蔚,陈芸,薛俊欣,熊挺,龙梦瑶,凌娇,王权. 2019

[15]柔嫩艾美耳球虫蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及免疫原性分析. 韩红玉,黄兵,林矫矫,赵其平,董辉,姜连连,徐梅倩,朱顺海. 2009

[16]弓形虫RH株热应激蛋白40基因的克隆与原核表达. 路静,张念章,田维鹏,殷铭阳,王瑞爱,周东辉,朱兴全,翁亚彪. 2014

[17]基于重组致密颗粒蛋白11的弓形虫胶体金免疫层析检测方法的建立. 张艳玲,孟庆玲,乔军,任宏琪,赵春光,宁程程,季春晖,才学鹏. 2021

[18]弓形虫烯醇化酶2基因的原核表达与鉴定. 张花景,蒋蔚,刘迎春,陈永军,李欣彤. 2014

[19]Carboxin抗性基因(Cbx~R)原核表达及多克隆抗体的制备. 李小宇,张正坤,王秋华,张春雨,张淋淋. 2015

[20]猪CD40L基因的原核表达及特异性多克隆抗体制备. 薛刚,祝长青,郑其升,张雪花,李倬,侯继波. 2011

作者其他论文 更多>>

微信小程序