副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 于江

作者： 于江;吴家强;张玉玉;王兆;李俊;丁鹏;李坤;刘洋;张金强;徐绍建;刘少宁;周顺;王文志;王金宝

作者机构：

关键词： 副猪嗜血杆菌;infB基因;SYBR Green I;荧光定量PCR

期刊名称： 家畜生态学报

ISSN： 1673-1182

年卷期： 2010 年 31 卷 04 期

页码： 81-85

摘要： 根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测HPS的技术。试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增。将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品。结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测。

分类号： S854.43

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