细菌脲酶蛋白复合物UreABC的表达与纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李晓姣

作者： 李晓姣;王加启;赵圣国;程建波

作者机构：

关键词： 细菌脲酶;脲酶结构基因;蛋白表达;蛋白纯化;脲酶活性

期刊名称： 微生物学杂志

ISSN： 1005-7021

年卷期： 2021 年 41 卷 003 期

页码： 14-20

收录情况： CSCD

摘要： 细菌脲酶能分解尿素为氨,在瘤胃尿素氮代谢中发挥重要作用.为了表达纯化并研究蛋白脲酶复合物UreABC,通过PCR扩增脲酶基因簇的结构基因ureA、ureB、ureC,将ureB构建在含有N端His标签的pet28a+载体,ureA、ureC基因共同构建在含有N端His标签的表达载体pETDuet-1,经酶切及测序鉴定得到正确的阳性克隆后,将两个质粒共同转化到大肠埃希菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达UreABC融合蛋白.采用SDS-PAGE凝胶电泳对蛋白表达进行鉴定,再通过蛋白纯化仪的镍柱、脱盐柱、分子筛纯化目的蛋白.结果显示,成功构建了两个原核表达载体pET28a-ureB、pET-ureC&A,脲酶基因ureA、ureB、ureC片段大小分别为313、315、1701 bp,以可溶性形式表达脲酶蛋白复合物,并通过纯化得到约240 kD的蛋白.通过脲酶活性测定试验发现,镍离子可以体外激活脲酶蛋白.通过原核表达系统成功表达和纯化了具有活性的脲酶蛋白,为研究蛋白结构以及其与辅助蛋白互作提供参考.

分类号： Q939.96

  • 相关文献
作者其他论文 更多>>

微信小程序