基于VIGS的柑橘黄化脉明病毒防控技术研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李楚欣

作者： 李楚欣;宋晨虎;周金环;李佳欣;王新亮;田旭斌;宋震

作者机构：

关键词： 柑橘黄化脉明病毒;pCLBV201;病毒介导的基因沉默;RNA干扰

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2024 年 57 卷 022 期

页码： 4473-4482

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】柑橘黄化脉明病毒（citrus yellow vein clearing virus,CYVCV）是一种严重危害柑橘产业的新发病毒，目前尚无有效的治疗药剂，主要通过使用无病毒苗木和严格防控传播虫媒进行防控。本研究旨在探索基于病毒介导的基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）的CYVCV防控技术，以期获得抗病毒“疫苗”，为柑橘病毒病防控提供新思路。【方法】基于实验室前期构建的VIGS载体pCLBV201，针对CYVCV基因组ORF1(open reading frame 1)、ORF6、CP(coat protein)和TGB(triple gene block)的保守区域设计、构建一系列重组载体，通过农杆菌介导的真空浸润接种尤力克柠檬并进行RT-PCR检测。获得pCLBV201-ORF1、pCLBV201-ORF6、pCLBV201-CP、pCLBV201-TGB阳性植株后，通过农杆菌介导的注射法接种CYVCV侵染性克隆，并以pCLBV201空载接种植株为对照，开展RT-qPCR、Western blot检测、症状观察和病情指数统计，从而明确不同VIGS重组载体对CYVCV的防控效果。【结果】构建了系列pCLBV201重组载体，接种后的RT-PCR检测结果表明，分别获得p CLBV201-ORF1、pCLBV201-ORF6、pCLBV201-CP、pCLBV201-TGB阳性植株多株；注射接种CYVCV侵染性克隆，7、14、28、70和150 dpi(days post infection)的RT-qPCR检测结果显示，pCLBV201-CP和pCLBV201-TGB处理组的CYVCV相对表达量均较对照显著降低；70和150 dpi Western blot检测结果表明，pCLBV201-CP和pCLBV201-TGB处理组的CP蛋白表达量显著下降；症状观察显示，对照组表现为严重的脉明、叶片扭曲等CYVCV侵染典型症状，pCLBV201-CP处理组植株的症状轻微，pCLBV201-TGB处理组植株不表现明显症状；70和150 dpi病情指数统计显示，pCLBV201-CP和pCLBV201-TGB的病情指数最低，分别为17.6、41.2和15.6、29.1，而对照组为52.1、80.0，差异明显。【结论】研发了基于VIGS的CYVCV防控技术，明确了pCLBV201-CP、pCLBV201-TGB能够显著降低病毒滴度、减轻病毒引起症状，有用作CYVCV防控“疫苗”的潜力。

分类号： S436.66

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