抗猪流感噬菌体单链抗体库的构建与筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨康

作者： 杨康;蒋蔚;刘迎春;陈永军;孙卫东;宋宁宁;王权

作者机构：

关键词： 猪流感病毒;噬菌体展示技术;单链抗体

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2012 年 44 卷 06 期

页码： 21-25

收录情况： 北大核心

摘要： 利用噬菌体展示技术构建猪流感病毒噬菌体抗体库,并筛选出猪流感高特异性、高亲和力的单链抗体(scFv)。以猪流感病毒免疫BALB/c小鼠,提取脾细胞总RNA,反转录后以cDNA为模板扩增获得VH基因和VL基因,并采用重叠延伸PCR(SOE-PCR),用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)按VH-Linker-VL方式将VH基因和VL基因拼接成scFv基因片段。将scFv基因和pCANTAB5E载体分别双酶切(SfiⅠ/NotⅠ)后连接,转化宿主菌TG1,经过辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体单链抗体库。以猪流感病毒为抗原包被96孔酶标板,经过3轮的亲和富集筛选,用Phage-ELISA鉴定阳性重组抗体。本研究成功构建出库容约为4×106cfu/mL抗猪流感病毒的单链抗体库,并筛选出4株特异性抗猪流感病毒的scFv抗体,能够与鼠源阳性多抗进行竞争结合猪流感病毒,为抗猪流感病毒转基因猪的研究奠定基础。

分类号： S852.65

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