双分子荧光互补系统的构建及其在病毒学中的初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张荣

作者： 张荣;陈春燕;韦祖樟;袁世山;童光志

作者机构：

关键词： 双分子荧光互补;荧光蛋白;蛋白质相互作用

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2013 年 03 期

页码： 27-32

摘要： 双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)是新近发展起来的研究蛋白质相互作用的技术,因其使用简便、检测灵敏、可在生理条件下直接观察,已在生物各领域广泛应用。本试验将黄色荧光蛋白EYFP突变为Venus,并在第173位氨基酸后分割为两段失去活性的VN和VC,经共转染表达不会产生荧光;在插入已被证明存在相互作用的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白经共转染表达时,可以观察到荧光;通过扩增MARC-145细胞的细胞骨架蛋白α-tubulin并插入到VN和VC,除与自身共表达时发出荧光外,与N蛋白共表达时没有荧光产生,说明该VN和VC片段用于研究蛋白互作是可靠的。本试验建立了BiFC系统,为以后应用到研究病毒编码蛋白之间及其与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。

分类号： S852.65

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