基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan Real-Time PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 殷亮

作者： 殷亮;王庆;曾伟伟;李永刚;王英英;刘春;梁红茹;石存斌;吴淑勤

作者机构：

关键词： 草鱼呼肠孤病毒;基因Ⅰ型;TaqMan Real-Time PCR;定量分析

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2014 年 38 卷 04 期

页码： 109-115

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立和应用可检测基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的荧光定量检测方法,实验根据基因Ⅰ型GCRV的S6保守序列,分别设计扩增目的条带661 bp普通引物(P1、P2)、扩增目的条带159 bp荧光定量引物(F1、F2)和一条探针;同时构建含有目的片段的PVAX1-S6作为标准质粒,10倍梯度稀释构建质粒拷贝数与Ct值的标准曲线(Y=-3.389X+38.076)。结果表明,此方法在3.9×107~3.9×101拷贝/μL之间相关性较好,R2为0.992,最小检测量为4拷贝/μL;且与基因Ⅱ型、Ⅲ型GCRV以及其他病原核酸无交叉反应。运用该方法检测16份草鱼出血病疑似样品,阳性结果为4份;而普通PCR检测仅2份显示阳性。本研究建立了针对基因Ⅰ型GCRV的荧光定量检测方法,具有高效、特异、灵敏、可重复性强的优点,适合于目前基因Ⅰ型GCRV的临床快速检测和病毒定量分析。

分类号： S943

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