基于适配体-杂交链式反应比色检测生鲜牛乳中四环素类抗生素

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘长勇

作者： 刘长勇;卢春霞;兰国伟;王娟;唐宗贵;陈霞

作者机构：

关键词： 四环素类抗生素;适配体;杂交链式反应;比色检测

期刊名称： 理化检验(化学分册)

ISSN： 1001-4020

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 371-377

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以特异性识别四环素类抗生素（TCs）的广谱型适配体为识别元件，结合杂交链式反应（HCR）信号放大策略，提出了一种TCs多残留比色检测方法，并优化了检测条件和进行了方法学考察。取40 nmol·L-1生物素化检测探针（bio-DP）溶液加入到包被有亲和素的酶标板中，室温孵育后加入牛血清白蛋白（BSA）溶液，封闭反应1 h。加入生鲜牛乳样品稀释液，室温孵育20 min,如果样品中含有TCs, TCs与bio-DP的适配体序列结合，其发夹结构被打开。加入200 nmol·L-1生物素化发夹DNA1（bio-H1）溶液和200 nmol·L-1生物素化发夹DNA2（bio-H2）溶液，室温下进行HCR 40 min,从而形成具有多个重复单元的双链DNA（dsDNA）纳米线。加入辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素（SA-HRP）,室温孵育标记dsDNA。加入显色剂[含3,3′,5,5′-四甲基联苯胺（TMB）],HRP催化TMB生成蓝色物质，显色5～8 min后终止反应，在酶标仪中于450 nm测量上述体系的吸光度。结果显示，bio-DP对四环素、土霉素、金霉素和多西环素具有高特异性，和卡那霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、泰乐菌素、磺胺嘧啶和恩诺沙星等抗生素无交叉反应。四环素、土霉素、金霉素和多西环素的质量浓度总和在0.8～100μg·L-1内与对应的吸光度总和呈线性关系，检出限（3s/k）为0.18μg·L-1。对生鲜牛乳样品进行加标回收试验，TCs回收率为86.4%～106%,测定值的相对标准偏差（n=3）为2.5%～7.1%。方法应用于生鲜牛乳样品的分析，检测结果与国家标准方法GB 31658.6-2021差异不显著（P＞0.05）,检出的TCs总量也均未超标（GB 31650-2019）。与文献报道的其他方法相比，上述方法兼具简单、快速、检出限低、准确度高等优点，适用于食品中四环素类抗生素多残留的快速检测。

分类号： O657.3%TS252.7

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