一种基于荧光微球标记的卡那霉素免疫层析定量方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐飞

作者： 徐飞;周洁;吴超;王建芬;丁双阳;李秀波

作者机构：

关键词： 荧光微球;免疫层析;卡那霉素;残留;牛奶

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2015 年 48 卷 21 期

页码： 4358-4365

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]卡那霉素是一种在奶牛兽医临床常用药物,其在牛奶中的残留不容忽视。荧光微球作为一种新型的荧光示踪物,近年来在小分子快速检测方面呈现出独特的优势,试验开展了卡那霉素荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在为牛奶中卡那霉素药物的快速筛选提供新型有效的检测手段。[方法]采用戊二醛法和过碘酸钠法制备了两种卡那霉素的包被抗原(KANA-GA-OVA1、KANA-I2-OVA2),抗卡那霉素的单克隆抗体通过蛋白G免疫亲和柱进行纯化后,采用碳二亚胺法与荧光微球进行了共价偶联,成功制备了抗体-荧光微球标记物。免疫层析试纸条方法采用微孔测定法。包被卡那霉素包被抗原的NC膜作为固相载体,荧光微球标记的单克隆抗体与样品混合,在微孔膜的毛细管作用下,包被抗原和待测样本中的药物来共同竞争有限的单克隆抗体,通过荧光测定包被抗原结合的抗体量来评价待测样本中卡那霉素药物的含量。[结果]灵敏度试验表明,微孔中加入0、6.25、12.5、25、50、100、200μg·L-17个浓度梯度的标准品溶液,卡那霉素药物浓度的增加,试纸条T线的荧光强度逐渐减弱,呈现抑制状态,以无标准品抑制的荧光峰高值为F0值,相应浓度标准品抑制时的荧光峰高值为F值,以F/F0为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。利用Originpro 8.0软件拟合,曲线符合四参数方程,R2为0.9998,IC50值为24.8μg·L-1,线性范围(以20%—80%抑制率对应的浓度计算)为9.5—100μg·L-1,最低检出限(以10%抑制率对应的浓度计算)为5μg·L-1。准确度和精密度试验表明,以25、50和100μg·L-13个浓度添加水平,平均添加回收率为78.4%—92.7%,批内变异系数为10.8%—12.4%,符合残留检测的需求。特异性试验表明,试验建立的卡那霉素荧光微球免疫层析方法对其他常见的氨基糖苷类药物的交叉反应率均<1%,说明方法特异性良好。[结论]所建立方法快速灵敏、简单有效,特异性好,具有推广价值。

分类号： S859.79

  • 相关文献

[1]可视化凝胶酶联免疫吸附分析法检测牛奶中庆大霉素和卡那霉素. 徐飞,栗静雅,周洁,刘茂林,刘义明,王建芬,丁双阳,李秀波. 2015

[2]量子点免疫层析技术在兽药残留快速检测中的应用. 宋乾召,王耀,胡骁飞,曹力,孙亚宁. 2024

[3]牛奶中β-内酰胺酶来源及其检测方法研究进展. 陈美霞,文芳,郑楠,杨晋辉,张勇,陈璐. 2015

[4]牛奶中β内酰胺类抗生素残留检测技术研究进展. 王淑婷,孙晓亮,曹旭敏,王晓茵,王玉东,赵思俊. 2018

[5]固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛奶中多种季铵类化合物残留. 魏瑞成,李国锋,高蓉,孙婷,龚兰,陈明,王冉. 2014

[6]液相色谱-串联质谱法测定牛奶中5种多肽类抗生素. 刘佳佳,金芬,佘永新,刘洪斌,史晓梅,王淼,王静,徐思远. 2011

[7]奶牛日粮中三聚氰胺在牛奶中残留规律及其对乳成分的影响. 哈斯额尔敦,王加启,卜登攀,魏宏阳,周凌云,王俊,许晓敏. 2010

[8]饲粮中三聚氰胺对乳成分的影响及其在牛奶中的残留规律. 赵小伟,哈斯额尔敦,王加启,卜登攀,魏宏阳,周凌云,王俊,许晓敏. 2012

[9]生鲜牛奶与消毒鲜牛奶中抗生素残留的检测比较. 陈雪华. 2007

[10]液相色谱-串联质谱法测定牛奶中5种多肤类抗生素. 刘佳佳,金芬,佘永新,刘洪斌,史晓梅,王淼,王静,徐思远. 2011

[11]超高压液相色谱-串联四极杆质谱法对牛奶中24种磺胺类药物残留的检测. 佘永新,刘佳佳,王静,刘永,王荣艳,曹维强. 2008

[12]咪鲜胺及2,4,6-三氯苯酚在牛奶中的残留检测方法. 吴琼,吕岱竹,韩丙军,黄海珠,张艳玲. 2017

[13]基于氮掺杂碳量子点的荧光微球制备和Fe~(3+)检测. 刘清浩,何艳飞,梁丽娜,念继鹏,胡志勇,郭金春,梁栋,刘红彦. 2018

[14]胶体金免疫层析快速检测技术及其在水产养殖业中的应用前景. 王蔚芳,李青梅,郭军庆,雷霁霖. 2010

[15]基于量子点免疫层析的布鲁菌抗体诊断卡研制. 祝令伟,纪雪,陈霞,陈俊,卢葛锦,郭学军,孙洋,郎需龙. 2022

[16]鹿布鲁菌病免疫胶体金检测试纸条的研制. 郭健,张月,王?舸,孙嘉慧,李艳,杨艳玲. 2019

[17]免疫层析技术在食物过敏原快速检测中的应用进展. 郭开通,胡骁飞,孙亚宁,邢云瑞,王成宾,吴佳蓓,王琳,宋乾召,杨海涛,王耀. 2024

[18]口蹄疫O、Asia1分型彩色胶乳试纸条诊断方法的建立. 蒋韬,任维维,梁仲,智晓莹,祁光宇,刘湘涛,才学鹏. 2011

[19]农产品中赭曲霉毒素A免疫层析试纸条快速检测技术研究. 李鑫,李培武,张奇,张文,丁小霞,唐晓倩. 2014

[20]检测猪瘟病毒野毒株胶体金免疫层析方法的建立. 王向鹏,孙元,杨增岐,仇华吉. 2010

作者其他论文 更多>>

微信小程序