猪MSTN前肽定点诱变载体在C2C12细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张晓玮

作者： 张晓玮;崔文涛;伍晓雄;杨述林;牟玉莲;唐中林;李奎

作者机构：

关键词： 猪;MSTN前肽基因;定点诱变;真核表达

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2009 年 40 卷 11 期

页码： 1588-1593

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序。再将目的片段定向克隆到去除了EGFP基因的pEGFP-N1表达载体上。通过定点诱变方法将前肽编码序列第76位天冬氨酸突变为丙氨酸,获得定点诱变载体pEGFP(-)-N1-ProMstnD76A,并瞬时转染C2C12细胞。转染48 h后,通过RT-PCR和Real-time PCR方法检测目的基因的表达情况。结果表明:本研究成功克隆了通城猪含第1个内含子的MSTN前肽基因,并对该基因进行定点诱变修饰,构建了真核表达载体,转染后其前体mRNA能在C2C12细胞中进行正确剪接,目的基因mRNA表达水平较高。这为猪MSTN前肽基因在体内表达的研究奠定基础,并为制备转基因猪提供有用的分子材料。

分类号： Q78

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