不吸水链霉菌ZBO1cyp107z基因的克隆及原核表达纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘卫德

作者： 蒋细良;冀颖;牛静;李梅

作者机构：

关键词： 不吸水链霉菌;cyp107z13;基因克隆;原核表达;阿维菌素

期刊名称： 微生物学报

ISSN：

年卷期： 2011 年 03 期

页码： 410-416

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】克隆不吸水链霉菌ZB01中的cyp107z基因,在E.coli中异源表达纯化,测定重组酶蛋白的酶动力学参数,为该基因的进一步研究奠定基础。【方法】根据cyp基因保守区序列设计引物,扩增不吸水链霉菌ZB01基因组中cyp107z基因的部分序列,通过染色体步移技术获取全长基因。利用pET28a表达载体构建该基因原核表达载体并于E.coli中诱导表达,以Ni-NTA亲和层析纯化表达出的重组蛋白。以阿维菌素为底物,构建重组蛋白体外催化体系,通过测定体系中NADPH的消耗,计算重组蛋白催化阿维菌素反应的酶动力学参数。【结果】从不吸水链霉菌ZB01基因组扩增出一条cyp107z基因同源基因,全长1...

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