流感病毒聚合酶PA亚单位抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 葛叶

作者： 葛叶;邓国华;李雪平;高玉伟;姚秋成;唐艳玲;陈化兰

作者机构：

关键词： 禽流感病毒;PA基因;抗血清

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2009 年 31 卷 04 期

页码： 314-317

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究采用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Zhejiang/11/00中分段及全长扩增PA基因片段,将目的基因定向克隆至原核表达载体pET-32a,经测序验证正确后,获得重组阳性质粒,将重组质粒转化BL21细菌后诱导,实现质粒在大肠杆菌中的表达,重组表达蛋白经Ni+柱纯化后分别与弗氏免疫佐剂乳化成油乳剂苗免疫新西兰大耳白兔,获得抗PA的免疫抗血清。Western blot检测结果表明抗血清与目的蛋白发生特异性反应。同时,将PA全长基因插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞,通过激光共聚焦显微镜发现,抗血清与PA基因的真核表达产物发生反应,出现特异性荧光,在细胞核与细胞浆中均出现荧光,进一步表明PA亚单位在细胞核与细胞浆均有分布。

分类号： S852.5

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