水貂肠炎病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈涛

作者： 陈涛;赵建军;张海玲;柴秀丽;闫喜军;吴威;钱爱东

作者机构：

关键词： 水貂肠炎病毒;原核表达;重组VP2蛋白;间接ELISA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2009 年 31 卷 09 期

页码： 712-716

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了对水貂肠炎病毒(MEV)疫苗免疫后抗体水平的监测和疫苗免疫效力的评价,本研究在分析MEV VP2蛋白抗原性的基础上,设计1对特异性引物克隆VP2蛋白抗原性较好的基因片段,将克隆的基因片段定向插入到pProEXHTb原核表达载体中,构建了VP2基因原核表达重组质粒pProEXHTb-VP2A,并实现在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,经鉴定表达的重组蛋白以包涵体形式存在,免疫印迹试验表明获得的重组蛋白具有与抗体较好的反应原性。应用His·Bind亲和层析柱纯化重组蛋白VP2A,以纯化后的重组蛋白作为ELISA诊断抗原,并对反应条件进行优化,初步建立了检测MEV抗体的VP2A-ELISA方法。确定了抗原最佳包被浓度为9.65μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶10。判定标准为S/P值≥0.312为阳性,S/P值≤0.243为阴性,介于两者之间为疑似。该抗原不与犬瘟热病毒、阿留申病毒阳性血清反应,具有良好的特异性。采用VP2A-ELISA对180份水貂血清样品进行检测,结果显示VP2A-ELISA与HI试验的符合率达到87.8%,表明建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,为现地免疫貂群抗体检测和MEV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。

分类号： S852.65

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