副猪嗜血杆菌oppA基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 车勇良

作者： 车勇良;陈如敬;江斌;王隆柏;魏宏;吴学敏;庄向生;周伦江

作者机构：

关键词： 副猪嗜血杆菌;寡肽结合蛋白基因;克隆;表达;间接ELISA

期刊名称： 福建农林大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-5470

年卷期： 2015 年 44 卷 03 期

页码： 282-288

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌(Hps)的寡肽结合蛋白(Opp A)基因,序列测定结果表明,扩增片段全长1654 bp.将扩增片段插入表达载体p GEX-6P-1中,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组融合蛋白大小约为87 ku,以纯化的重组蛋白Opp A作为抗原,建立Hps抗体的间接ELISA检测方法.通过试验确定最佳的反应条件为:抗原包被浓度为1.0μg·孔-1,于37℃包被1 h,待检血清的稀释度为1∶50,阳性判断标准(D450 nm)大于0.643.特异性和重复性试验结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和稳定性,可用于Hps抗体的检测.

分类号： S852.61

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