鸭源NF-κB1基因荧光定量PCR方法建立及其初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张飘

作者： 张飘;贺欣薇;杨霞;曾茂芹;刘妍罕;张扬子;杨颖;温贵兰;程振涛;文明

作者机构：

关键词： 鸭;NF-kB1基因;荧光定量PCR;建立;应用

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2021 年 002 期

页码： 215-222

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立鸭NF-κB1（nuclear factor-kappa B, NF-κB）基因的荧光定量PCR检测方法,并以建立的方法检测鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblasts, DEF）在感染鸭肠炎病毒（DEV）后NF-κB1基因随时间变化转录表达量的变化情况。根据GenBank上NF-κB1基因保守序列设计特异性引物,以鸭胚成纤维细胞mRNA提取样本反转录为cDNA,进行NF-κB1基因克隆质粒构建,以此为模板建立鸭NF-κB1基因荧光定量PCR检测方法并进行特异性、重复性和敏感性试验,并利用建立的方法DEF感染DEV后NF-κB1基因随时间变化的转录变化进行检测。结果显示:建立的鸭NF-κB1基因荧光定量PCR方法标准曲线呈现典型的S型,方程为y=-3.12x+44.086（R2=1）,扩增效率为109.2%;其熔解温度Tm值为（83.5±0）℃,曲线呈特异性单峰,批内变异系数小于0.3%,批间变异系数小于0.2%;检测灵敏度可达到1.79个拷贝。DEF细胞在感染DEV后NF-κB1基因随时间改变转录水平变化无规律,但整体表达水平高于正常细胞,差异显著（P<0.05）,36～84 h NF-κB1基因的转录水平与正常细胞中差异极显著（P<0.01）。本研究成功建立了鸭NF-κB1基因荧光定量PCR检测方法,并对DEF细胞感染DEV后NF-κB1基因的转录水平进行了研究,为后续实验研究提供了技术和数据支撑。

分类号： S858.32

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