亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白的表达及其杂交瘤细胞株的筛选与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王立群

作者： 王立群;梁盼红;张少华;侯俊玲;王莉杰;毛立;骆学农

作者机构：

关键词： 亚洲带绦虫;45 kDa雌激素调节蛋白;杂交瘤细胞株

期刊名称： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志

ISSN： 1000-7423

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 70-74

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的筛选并制备亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白(Ta EP45)的杂交瘤细胞株。方法设计带有酶切位点的特异性引物,以亚洲带绦虫成虫总RNA为模板, RT-PCR扩增Ta EP45完整的开放阅读框(ORF),克隆至原核表达载体pET-30a (+),转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达带组氨酸(His)标签的TaEP4蛋白,用亚洲带绦虫囊尾蚴阳性猪血清蛋白质印迹(Western blotting)分析Ta EP45的反应原性。以纯化的Ta EP45免疫BALB/c小鼠(100μg/鼠,首次免疫用等量弗氏完全佐剂,第2、第3次免疫用等量弗氏不完全佐剂),选择血清抗体效价高的小鼠,取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,用纯化的Ta EP45和His标签蛋白ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,用亚洲带绦虫全虫抗原Western blotting鉴定杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。结果 RT-PCR扩增获得的Ta EP45基因ORF长1 362 bp,编码453个氨基酸。重组融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为60 000,可被亚洲带绦虫囊尾蚴阳性猪血清识别。筛选获得5株稳定分泌Ta EP45抗体的杂交瘤细胞株,其抗体效价均≥1∶2 430,亚型分别为IgG2b或IgG1。Western blotting分析结果显示, 5株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体均能与亚洲带绦虫全虫抗原发生反应。结论表达纯化了Ta EP45,筛选出5株能稳定分泌高滴度Ta EP45单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体能与亚洲带绦虫全虫抗原发生反应。

分类号： R383.32

  • 相关文献

[1]牛带绦虫和亚洲带绦虫全基因组测序、比较基因组及胰岛素信号通路研究. 王帅,才学鹏. 2015

[2]PCR-RFLP技术鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫. 王力,骆学农,刘光学,才学鹏. 2015

[3]犬瘟热病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立. 孙婧,毕振威,夏兴霞,王晓丽,诸玉梅,董晨红,贾红,朱瑞良,王永山. 2013

[4]布鲁氏菌单克隆抗体的研究Ⅲ.单克隆抗体的理化性质及生物学特性. 卢景良,李节棠,王振生,林秀英,孔宪刚,尚芙蓉,黄华梁,宁益华,宋海燕,尧淑芳. 1986

[5]抗绵羊进行性肺炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立. 符子华,李淑霞,呼西旦,吴铭齐,王进成,龚成润. 1993

[6]猪细小病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定. 刘运超,杨苏珍,陈玉梅,王聚财,尚延丽,魏蔷,陈维聪,冯华,张改平. 2021

[7]抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立. 杨百亮,冯力,赵翠萍,孙东波,张建斌. 2005

[8]人促甲状腺激素单克隆抗体的制备及鉴定. 乔元彪,王权,张文举,陈沁. 2013

[9]鹅细小病毒杂交瘤细胞株的建立与筛选. 朱小丽,程晓霞,陈仕龙,林锋强,王劭,陈少莺. 2008

[10]犬瘟热病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立. 毕振威,夏兴霞,王晓丽,诸玉梅,董晨红,贾红,朱瑞良,王永山. 2013

[11]旋毛虫单克隆抗体特性鉴定. 王克领,李春华,马增全,闫玉河,袁文甫,许威光. 1994

[12]布鲁氏菌单克隆抗体的研究Ⅱ酶联McAb试剂在诊断上的应用. 卢景良,王振生,石宗舫,李节堂,马云燕,孔宪刚,刘玉梅,武志强,王志国,黄华梁,尚芙蓉,尧素芳. 1986

[13]旋毛虫单克隆抗休特性鉴定. 王克领,李春华. 1999

[14]鸭疫里默氏杆菌交叉反应性单克隆抗体的研制. 周小进,胡青海,韩先干,朱寅玉,丁铲,于圣青. 2010

作者其他论文 更多>>

微信小程序