文献类型： 中文期刊
第一作者： 李莉
作者： 李莉;周博宇;李威;金春梅;于龙政;张厚双
作者机构：
关键词： 弓形虫;TgGRA4;重组腺病毒;构建;鉴定
期刊名称： 中国动物传染病学报
ISSN： 1674-6422
年卷期： 2022 年 30 卷 003 期
页码： 1-6
收录情况： 北大核心
摘要： 本研究通过构建表达弓形虫致密颗粒抗原4(TgGRA4)蛋白的重组腺病毒vAd5-TgGAR4,并在HEK293细胞内包装病毒后进行蛋白表达,为弓形虫病疫苗研发提供研究基础.采用PCR方法扩增弓形虫TgGRA4基因,将其连接到pCR259穿梭载体上,构建重组穿梭载体pCR259-TgGRA4;之后转化到含有腺病毒载体Transpose-AdTM 294的HighQ-1 Transpose-AdTM 294感受态细胞中,通过同源重组获得重组腺病毒载体294-TgGRA4;载体质粒经Pac Ⅰ酶切线性化后转染至HEK293细胞,包装重组腺病毒vAd5-TgGRA4,TCID50方法测定病毒滴度.经PCR鉴定和测序,获得TgGRA4基因,与参考序列(M76432)同源性为100%,经EcoR Ⅰ、Xba Ⅰ双酶切鉴定、蛋白质印迹和IFA检测,表明重组穿梭载体pCR259-TgGRA4构建成功,并能表达TgGRA4蛋白,经NdeⅠ酶切鉴定,表明重组腺病毒载体294-TgGRA4构建成功,IFA检测包装的重组腺病毒vAd5-TgGRA4能表达TgGRA4蛋白,初代重组腺病毒滴度为2.85×108 IU/mL.当感染复数(MOI)=10,病毒滴度可以提高到4.34×108 IU/mL.本研究构建了含有弓形虫TgGRA4基因的重组腺病毒载体294-TgGRA4,制备了高滴度的vAd5-TgGRA4并能表达目的蛋白.
分类号： S852.72
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