一种同时检测4种山羊肠道寄生虫多重PCR方法的建立与初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李奕龙

作者： 李奕龙;穆宣儒;许辉;罗晓平;余润梓;许欣怡;杨琳琳;余新刚;洪炀

作者机构：

关键词： 肠道寄生虫;十二指肠贾第鞭毛虫;微小隐孢子虫;毕氏肠微孢子虫;莫尼茨绦虫;多重PCR法;山羊

期刊名称： 中国血吸虫病防治杂志

ISSN： 1005-6661

年卷期： 2024 年 36 卷 004 期

页码： 376-383

收录情况： CSCD

摘要： 目的 建立一种可同时检测十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫和莫尼茨绦虫等4种山羊肠道寄生虫的多重PCR检测方法，并初步评估其检测效能。方法 基于GenBank中十二指肠贾第虫（GenBank登录号：XM＿001710026.2）、微小隐孢子虫（GenBank登录号：XM＿626998.1）、毕氏肠微孢子虫（GenBank登录号：KJ719492.1）和莫尼茨绦虫（GenBank登录号：OM296991.1）相应基因的保守序列设计4对特异性引物，建立并优化可同时检测上述4种寄生虫的多重PCR方法。2022年10—12月，从广东省湛江市4个山羊养殖场采集116份新鲜山羊粪便样本，其中96份用于所建立多重PCR方法的检测效能评价、20份作为样本检测的本底对照。分别采用单病原PCR检测方法及本研究所建立的多重PCR方法，对96份山羊粪便DNA样本进行检测。以单病原PCR检测结果为金标准，计算多重PCR法的检测灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果 本研究所建立的多重PCR方法可同时扩增出十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫和莫尼茨绦虫特异性基因片段，其大小分别为1 400、755、314 bp和585 bp，检出限为≥102拷贝数的病原DNA克隆质粒；该方法对日本血吸虫、羊前后盘吸虫、细粒棘球绦虫、芽囊原虫和平腹吸虫基因扩增结果均为阴性。采用单病原PCR和所建立的多重PCR方法检测96份山羊粪便DNA样本，40份（40/96,41.67%）粪便DNA经单病原PCR检测出现阳性扩增产物，其中39份经多重PCR检测亦出现阳性扩增产物，平均符合率为97.50%(39/40)。96份样本中，多重PCR方法分别检出十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫、莫尼茨绦虫感染阳性26(27.10%)、22(22.90%)、24(25.00%)、9份（9.40%），与单病原PCR检测结果一致。以单病原PCR检测结果为金标准，多重PCR法对山羊粪便样本中十二指肠贾第虫、毕氏肠微孢子虫、微小隐孢子虫和莫尼茨绦虫DNA检测灵敏度分别为96.15%、95.83%、100.00%、100.00%，阴性预测值分别为98.90%、98.92%、100.00%、100.00%，阳性预测值均为100.00%。结论 本研究建立了一种可同时检测十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫和莫尼茨绦虫等4种山羊常见寄生虫的多重PCR方法，该方法灵敏度高、特异性好，适用于大规模羊群粪便样本快速筛查。

分类号： S858.27

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