基于全基因组序列合成的禽副黏病毒Ⅱ型反向遗传操作系统的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王国康

作者： 王国康;李丽;贾妙妙;冯贺龙;曾驰;罗青平;温国元

作者机构：

关键词： 禽副黏病毒Ⅱ型;反向遗传技术;新城疫病毒;人工合成;

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2022 年 003 期

页码： 464-471

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立禽副黏病毒Ⅱ型（avian paramyxovirus 2,APMV-2）的反向遗传操作平台，对NCBI已经公布的12条APMV-2全基因组序列进行分析比对，选取较为保守的F8株为模板，将该毒株基因组中特有的10处核苷酸突变为其他毒株共有的一致序列，增加一段大部分毒株共有的非编码区序列，获得了1株新的APMV-2（命名为Y2株）的全基因组序列。通过人工合成和克隆的方法，构建并获得了Y2株全长cDNA克隆质粒和3个分别表达NP、P和L的辅助质粒。将4个重组质粒共转染至感染痘病毒的BHK-21细胞，成功拯救出APMV-2 Y2株。生物学特性测定结果显示，Y2株的鸡胚最低致死剂量的平均致死时间（MDT）大于168 h, 1日龄雏鸡的脑内致病指数（ICPI）为0.09,判定为弱毒株，鸡胚尿囊液的病毒含量为108.83 EID50/mL,HA效价为9 log2。病毒增殖曲线测定结果显示，Y2株感染BHK-21细胞后60 h滴度达到峰值。APMV-2 Y2株反向遗传操作系统的建立为该病原的致病机理研究及新型禽用疫苗研发提供了依据。

分类号： S852.65

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