拟南芥丝氨酸羟甲基转移酶(AtSHMT)的原核表达与酶活测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 江晶晶

作者： 江晶晶;张春义;姜凌

作者机构：

关键词： 丝氨酸羟甲基转移酶;亲和色谱;酶活测定

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2014 年 16 卷 06 期

页码： 14-20

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从拟南芥叶片中克隆了定位于线粒体的拟南芥丝氨酸羟甲基转移酶基因(At SHM1),将其插入到p ET-26b(+)表达载体,并在大肠杆菌中成功表达。优化表达条件之后,获得可溶性At SHMT蛋白。用亲和色谱法成功分离纯化该蛋白,计算得到该酶酶学常数Km和Kmax分别为121μmol和21.8μmol/L·min。利用该酶催化DL-3-苯基丝氨酸裂解的产物苯甲醛在279 nm波长处有强烈吸收的性质,测定反应产物的吸光值,根据苯甲醛标准曲线测得At SHMT酶活,由此建立了一种测定真核生物丝氨酸羟甲基转移酶酶活的一种简便、快速、安全的方法。

分类号： Q946.5

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