转基因水稻Bt汕优63的整合结构和品系特异性定量PCR方法

文献类型： 中文期刊

第一作者： 苏长青

作者： 谢家建;王奕海;王锡锋;彭于发

作者机构：

关键词： 抗虫水稻;Bt汕优63;标准质粒;品系特异性;实时PCR

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2011 年 19 卷 03 期

页码： 48-55

收录情况： 北大核心

摘要： 为更好地监测转基因抗虫水稻(Oryza sativa L.)Bt汕优63品系的存在,满足转基因标识管理的要求,同时也为了解决阳性植物基因组DNA不容易获得的问题,本研究采用热不对称交互PCR(TAIL-PCR)、Genome Walking和长链PCR(LD-PCR)方法测定了基因枪转化的转cry1Ab/cry1Ac融合基因水稻品系Bt汕优63的外源插入DNA全序列,构建了含有Bt汕优633'旁侧和水稻内标基因gos9序列的标准质粒分子pMDBt63作为标准物质,建立了Bt汕优63实时荧光定量PCR方法。外源插入DNA全长9818bp,位于水稻基因组10号染色体(AP008214)第5348630位,由8个来源于两个转化质粒的DNA片段组成,其中两个cry1Ab/cry1Ac表达框以正向串连的方式插入。gos9和3'旁侧两个定量标准曲线的相关系数(R2)分别为0.9997和0.9992,扩增效率(E)分别为98.05%和99.46%。每反应100ng模板DNA的检测限(LOD)为10拷贝,定量限(LOQ)为100拷贝。此外,对已知5%和1%转基因含量的混合样品DNA进行定量检测,结果的平均值分别为4.98%和1.07%。结果表明标准质粒pMDBt63作为标准物质建立的定量方法可用于Bt汕优63的定量检测。

分类号： S511

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