文献类型： 中文期刊
第一作者： 何金灵
作者： 何金灵;杜荣起;郑淇月;宋淇淇;张东超;金天明
作者机构：
关键词： 弓形虫;DNA疫苗;ROP5;ROP9;ROP17
期刊名称： 天津农学院学报
ISSN： 1008-5394
年卷期： 2023 年 30 卷 003 期
页码： 40-46
摘要： 研究旨在构建弓形虫鸡尾酒DNA疫苗并评价其对小鼠的免疫保护效果.研究将编码弓形虫棒状体蛋白ROP5、ROP9 和ROP17 的基因分别构建至真核表达载体pVAX1 上,获得重组真核表达质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP9 和pVAX1-ROP17,将上述质粒进行PCR和双酶切验证,并通过Western blot检测重组质粒在真核细胞中表达.将三种重组质粒按 1∶1∶1 的比例混合后,取100 μg通过腿部肌肉注射免疫小鼠,加强免疫后,检测小鼠血清抗体、脾淋巴细胞增殖及细胞因子水平,并接种弓形虫RH强毒株进行攻毒,评价免疫后小鼠的保护效果.真核表达质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP9和pVAX1-ROP17经PCR和双酶切验证的结果显示:分别在1 686 bp、1 128 bp和1 836 bp处出现特异性目的条带;Western blot检测结果发现,在约为 62、41 和 68 kDa处出现目的条带,分别与预期目的蛋白ROP5、ROP9 和ROP17 的分子量大小相符.与空载体组和生理盐水组小鼠相比,疫苗免疫组小鼠产生的血清中抗体IgG和淋巴细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-6 水平、脾脏淋巴细胞增殖的刺激指数(SI)均极显著升高(P<0.01),且接种弓形虫RH强毒株后,免疫组小鼠的存活时间(16.1±2.07)比对照组小鼠存活时间(9.2±0.74 或 9.0±0.77)极显著延长(P<0.01).研究结果表明,成功构建的弓形虫鸡尾酒DNA疫苗pAX1-ROP5/ROP9/ROP17 能激发小鼠的体液免疫反应和细胞免疫反应,并增强小鼠对弓形虫感染的抵抗能力.研究结果为弓形虫新型疫苗研制提供借鉴和参考.
分类号： S855.9
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