籽粒苋C_4关键酶丙酮酸磷酸双激酶基因的原核表达及酶活性测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 贺飞燕

作者： 贺飞燕;闫建俊;白云凤;冯瑞云;张维锋

作者机构：

关键词： 籽粒苋;AhPPDK;原核表达;酶活测定

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2017 年 32 卷 02 期

页码： 61-65

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了进一步探究籽粒苋丙酮酸磷酸双激酶(AhPPDK)蛋白的作用机制,构建了AhPPDK基因的原核表达载体,通过碱裂解提取质粒,经限制性内切酶酶切,采用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物,选择正确表达的阳性重组子,将测序正确的重组质粒p EASY-E1-AhPPDK转化菌株Transetta(DE3);利用IPTG诱导蛋白表达。SDS-PAGE凝胶电泳分析表明,重组AhPPDK能在大肠杆菌Transset(DE3)中高效表达,表达的重组蛋白质分子量约为108 k Da,与预期分子量相符,且为可溶性蛋白。利用紫外分光光度法测量结果表明,原核表达的AhPPDK具有酶活性,且上清粗酶液活性高于沉淀粗酶液。研究结果可为进一步探明AhPPDK蛋白的作用机制和转基因利用奠定基础。

分类号： S330`Q78

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