检测猪圆环病毒DNA的竞争定量PCR方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 崔尚金

作者： 崔尚金;蔡阳;陈欣

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒PVC-2;竞争定量PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2004 年 26 卷 05 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 建立了定量检测猪圆环病毒DNA的竞争PCR方法。应用PCR扩增PCV-2 ORF2上490 bp片段P3P4,克隆到pMD 18-T载体获得目标模板。构建含692 bp的c-P3P4 DNA片段的竞争模板,其携带与目标DNA和靶DNA相同的引物结合区。以定量的竞争模板同一系列稀释的竞争模板进行竞争PCR扩增,以产物的荧光强度(IOD)绘制标准曲线,结果当反应体系中起始模板的量为1.0×10~7 cop/μL,循环次数小于或等于30时,原始模板数以指数增长。由此确定目标模板和竞争模板的最适工作浓度并用该方法检测感染细胞内的PCV-2基因组的拷贝数和临床样品中的PCV-2 DNA含量,结果发现临床样品中的PCV-2 DNA含量达到一定程度(肺中1.0145×10~8copies/mL,血中0.8×10~7 copies/mL,淋巴中9.698×10~8copes/mL),猪表现临床症状,而病毒在感染细胞内的复制在80 h基因的拷贝数达到最高,这为今后的研究奠定了基础。

分类号： S852.659.2

  • 相关文献

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