非洲猪瘟病毒pE120R蛋白单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘传霞

作者： 刘传霞;王晓;李雪雯;鲍苗菲;李婷婷;陈欣;翁长江;郑君

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;pE120R蛋白;原核表达;单抗隆抗体

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 55 卷 001 期

页码： 388-394

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在表达非洲猪瘟病毒(ASFV)衣壳蛋白pE120R,并制备单克隆抗体,为其功能研究提供材料.以pCAGGS-Flag-pE120R为模板扩增pE120R基因片段,构建原核表达质粒pGEX-6p1-pE120R.将其转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达为可溶性pE120R蛋白,采用GST Beads纯化pE120R蛋白,免疫BALB/c小鼠,然后取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,采用间接ELISA方法筛选获得了 1株能够稳定分泌pE120R单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果表明,成功构建了原核表达质粒pGEX-6p1-pE120R,并获得较高纯度的pE120R蛋白.Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果显示,pE120R单抗能特异性识别HEK293T细胞转染质粒表达的Flag-pE120R蛋白和肺泡巨噬细胞(PAMs)感染ASFV后表达的pE120R蛋白.该单抗的结合位点在30~60aa区域,并且该单抗亚类鉴定重链为IgG2a.本研究成功表达并纯化了可溶性的pE120R蛋白;制备了抗pE120R的单抗隆抗体,该抗体具有良好的特异性,为深入探讨ASFV pE120R蛋白的生物学功能奠定了基础.

分类号： S852.651

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