大肠杆菌耐药基因TD-PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 潘永

作者： 潘永;王可人;李婷;杨莉;李刚;张亚楠;徐景峨

作者机构：

关键词： 大肠杆菌;耐药基因;TD-PCR;特异性

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 003 期

页码： 269-277

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种检测大肠杆菌主要耐药基因（ARG）的通用降落PCR （TD-PCR）方法，本研究参考大肠杆菌标准菌株K12 MG1655 yeeJ基因序列设计合成不同Tm值引物、不同产物长度引物、不同长度引物，并参考Gen Bank中登录的β-内酰胺酶、氨基糖苷类、酰胺醇类、喹诺酮类和黏菌素类部分ARG序列设计合成共29对引物。以大肠杆菌标准菌株K12 MG1655总DNA为模板，采用TD-PCR和普通PCR方法，分别利用不同Tm值引物（P1～P8）、不同产物长度引物（P9～P16）、不同长度的引物（P17～P22）分别扩增yeeJ基因，均用于检测TD-PCR方法的特异性；利用引物P5扩增yeeJ基因，根据目的条带平均亮度值，对TD-PCR方法的扩增产物量分析。不同Tm值引物的扩增结果显示，TD-PCR方法中利用8对不同Tm值引物扩增后均出现目的条带，且均无非特异性条带，而普通PCR方法仅有部分引物扩增后出现目的条带，表明以不同Tm值引物扩增时，TD-PCR方法特异性更强，且适用引物Tm值范围较广。不同产物长度扩增结果显示，TD-PCR方法中利用8对引物扩增后均出现相应目的条带，且无非特异条带，而普通PCR方法虽然均出现目的条带，但部分引物扩增后还出现了非特异性条带，表明以不同产物长度引物扩增时，TD-PCR方法的特异性更强。不同长度的引物扩增结果显示，TD-PCR方法中利用6对不同长度的引物扩增后均出现目的条带，且无非特异条带，而普通PCR方法在52℃退火温度时引物P22出现非特异性扩增，表明TD-PCR方特异性更强。扩增产物量分析结果显示，TD-PCR和普通PCR方法扩增的目的条带平均亮度值均随反应总循环数的增加而上升，但普通PCR方法扩增的产物目的条带平均亮度值始终高于TD-PCR，表明TD-PCR方法的扩增产物量低于普通PCR。以24株临床分离的鹅源大肠杆菌总DNA为模板，采用TD-PCR和普通PCR方法，分别对β-内酰胺酶、氨基糖苷类、酰胺醇类、喹诺酮类和黏菌素类共29种ARG进行检测。结果显示，TD-PCR方法对其中25种ARG的检测结果与普通PCR相同，二者符率为100%；而对另外4种ARG检测结果显示，与普通PCR相比，TD-PCR方法的非特异条带明显减少，且无假阳性。表明TD-PCR在检测ARG方面比普通PCR具有更强的特异性。本研究建立了一种特异性较强的检测大肠杆菌主要ARG的TD-PCR通用方法，为细菌耐药性的研究提供了便捷高效的检测技术手段。

分类号： S852.61

  • 相关文献

[1]污水厂产超广谱β内酰胺酶大肠杆菌通过接合水平传递耐药性. 李晴,张红娜,刘玉庆,翟静,常维山. 2017

[2]牛源乳腺致病性大肠杆菌JL05全基因测序及毒力和耐药基因分析. 曲星霖,肖丹,吴健,马晓媛,白翠,王妍,王楠. 2020

[3]蛋鸡投喂氟苯尼考后大肠杆菌耐药性变化及耐药基因检测. 周倩,张小燕,马尹鹏,陈大伟,唐修君,陆俊贤,张静,唐梦君,高玉时. 2020

[4]山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析. 苑晓萌,赵效南,李璐璐,张庆,胡明,骆延波,张印,齐静,刘玉庆. 2021

[5]山东部分地区鸭源大肠杆菌耐药性分析. 宋毅,李银涛,常维山,王祥锟,撒瑞雪,刘建华,苗立中. 2023

[6]大肠杆菌外膜蛋白ompF基因与Ⅰ类整合酶基因在生物被膜状态下表达相关性的研究. 王艺凝,周建华,马丽娜,李学瑞,刘永生. 2020

[7]广东地区畜禽源大肠杆菌的耐药性与流行性研究. 李亚菲,梁晓云,吴荔琴,肖田安,王富华,曾振灵. 2024

[8]山西省鸡源性大肠杆菌多重耐药性分析. 王志宇,王国艳,薛俊龙,张伟业,孙仰介,刘源. 2018

[9]鸡源CTX-M基因型ESBL大肠杆菌耐药基因的转移性检测分析. 李文超,苗艳. 2022

[10]广州市某马术俱乐部马源大肠杆菌的分离鉴定、毒力基因检测及耐药性分析. 刘鏊,马丁允,陀海欣,李静,王超男,孙铭飞,林栩慧,齐萌. 2023

[11]新疆部分地区奶牛源大肠杆菌的流行性与耐药性分析. 马洪鹏,邵伟,娄肖肖,高姣姣,马宪兰,陈贺,郑楠,赵艳坤. 2025

[12]福建省多黏菌素耐药基因mcr-1阳性鸡源大肠杆菌的流行性及耐药性分析. 戴婷婷,陈海玉,段楚楚,庄丽云,刘荣昌,陈慧慧,余小珍,杨欣,陈梦诗,包银莉,程艳青,华宝玉,黄翠琴,郑新添. 2025

[13]免疫学诊断试验结果的评估. 郑润宽,卢岩,高文渊,刘世明,马小平. 2003

[14]山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊断试剂盒的研发及应用. 文正常,潘淑惠,王璇,蔡一鸣,万一元. 2011

[15]牛双芽巴贝斯虫PCR检测方法的建立及初步应用. 吴位珩,杨茂生,廖明,廖梅,杨莉,徐景峨,伍祥龙. 2009

[16]间接ELISA法对山羊传染性胸膜肺炎的快速诊断. 王璇,文正常,潘淑惠,蔡一鸣,万一元. 2011

[17]玉米DUS测试概述. 张瑞英. 2005

[18]山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊断试剂合盒的研发及应用. 文正常,潘淑惠,王璇,蔡一鸣,万一元. 2011

[19]辣(甜)椒DUS测试技术和方法初探. 陈海荣,吕波,王加红,韦祝山,陈大虎,葛国军,顾晓君. 2005

[20]水稻新品种测试中性状差异显著性判定的分析. 陈海荣,顾晓君. 2003

作者其他论文 更多>>

微信小程序