番茄转录因子基因SlWRKY6的克隆与原核表达分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周涛

作者： 周涛;王娟;胡佳蕙;王柏柯;李宁;余庆辉

作者机构：

关键词： 番茄;SlWRKY6;亚细胞定位;qRT-PCR;原核表达

期刊名称： 西北植物学报

ISSN： 1000-4025

年卷期： 2020 年 40 卷 011 期

页码： 1824-1832

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 该研究基于番茄基因组数据库SGN(Sol Genomic Network)信息,利用RT-PCR从栽培番茄'M82'(Sola-num lycopersicum)中成功克隆到番茄SlWRKY6基因(登录号:Solyc02g080890),通过qRT-PCR方法和原核表达初步验证其生物学功能.结果表明:(1)生物信息学分析显示,番茄SlWRKY6基因ORF全长1653 bp,编码550个氨基酸,其蛋白结构含有1个WRKYGQK保守结构域和C2 H2锌指结构域,属于Ⅱb类;其基因启动子上游1500 bp含有多个激素响应元件和非生物胁迫响应元件.(2)进化树分析显示,SlWRKY6与潘那利番茄Sp-WRKY31-X1(NP_001352691.1)的相似性最高,且定位于细胞核内.(3)qRT-PCR结果显示,SlWRKY6基因在番茄根、茎、叶中均有表达,在叶中的表达量最高,且受盐和干旱诱导表达.(4)SDS-PAGE及Western blot结果显示,pET-30a-SlWRKY6重组蛋白的大小约66 kDa,与预期大小一致.(5)原核表达分析显示,重组菌E.coli BL21∷pET-30a-SlWRKY6在不同浓度盐(NaCl)和干旱(Mannitol)胁迫下生长速度显著低于对照菌E.coli BL21∷pET-30a,且在400 mmol/L NaCl、800 mmol/L甘露醇胁迫条件下最为显著;滴板实验初步验证SlWRKY6转录因子能提高重组菌E.coli BL21∷pET-30a-SlWRKY6在ABA和pH 9(NaOH)胁迫的耐受性;在400 mmol/L NaCl、pH 5(HCl)、800 mmol/L甘露醇胁迫条件下耐受能力降低.研究表明,SlWRKY6转录因子可能通过参与ABA途径来响应非生物胁迫.

分类号： Q785%Q786%Q789

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