大口黑鲈PTEN基因的克隆、组织表达及初步功能分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李佳鑫

作者： 李佳鑫;高风英;董浚键;孙成飞;张赫桐;朱芷琳;王庆奎

作者机构：

关键词： 大口黑鲈;第10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN);基因克隆;组织表达;亚细胞定位;双荧光素酶活性分析

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2025 年 33 卷 007 期

页码： 1553-1567

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 第10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)是迄今发现的第1个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，在多种信号通路中发挥重要作用。为了阐明鱼类PTEN在核因子κB (nuclear factor kappa-B, NF-κB)、干扰素(interferon,IFN)和激活蛋白-1 (activator protein-1, AP-1)信号通路中的调控作用，本研究利用逆转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法从大口黑鲈(Micropterus salmoides)中扩增并克隆了PTEN基因ORF序列，利用qPCR检测了不同病原体相关分子模式—诺卡氏菌(Nocardia seriolae)、大口黑鲈蛙病毒(Largemouth bass virus, LMBV)及聚胞肌酸Poly I:C对大口黑鲈PTEN基因表达水平变化的影响。通过构建真核表达质粒pCMV-Flag-PTEN对大口黑鲈PTEN进行亚细胞定位以及过表达对NF-κB、AP-1、IFN启动子荧光素酶活性的激活作用进行研究。蛋白质序列分析显示，大口黑鲈PTEN编码了439个氨基酸，其中包含1个PTPc结构域和1个PTEN＿C2结构域，在系统发育树中与其他硬骨鱼类PTEN家族聚为一支。qPCR检测发现PTEN在健康的大口黑鲈多种组织中广泛表达，且在脾脏和鳃中高表达。人工感染诺卡氏菌可引起PTEN基因表达量显著下降；注射LMBV、Poly I:C后，PTEN基因表达量呈先下降后上升或先上升后下降的表达趋势。亚细胞定位结果显示，大口黑鲈PTEN在HEK-293T细胞的细胞质和细胞核中分布。双荧光素酶活性分析发现过表达pCMV-Flag-PTEN可以增强AP-1和抑制NF-κB、IFN启动子荧光素酶活性。以上研究表明，大口黑鲈PTEN可以通过激活AP-1和抑制NF-κB、IFN信号通路，在机体抗细菌和抗病毒先天免疫应答中发挥重要的调控作用。本研究为阐明大口黑鲈抗病免疫应答机制的研究提供基础资料，为抗菌疫苗开发、抗病品种(系)的选育提供理论基础。

分类号： S917.4

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