牛分枝杆菌MPB83基因的原核表达及免疫活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张秀华

作者： 张秀华;刘思国;王春来;郭设平;郭洋;邵美丽;宫强;彭永刚;沈国顺

作者机构： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所;沈阳农业大学畜牧兽医学院;东北农业大学动物医学院

关键词： 牛分枝杆菌;MPB83基因;原核表达;Western blot;抗血清;ELISA

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1003-3505

年卷期： 2005 年 25 卷 11 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR技术,以牛型分枝杆菌(M.bovis)Vallee菌株的全基因组DNA为模板,扩增出了一条600bp的MPB83基因片段,将其克隆至pMD18T载体中,经核苷酸序列测定确证后,KpnI/EcoRI双酶切,然后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点,构建表达质粒pETMPB83,将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDSPAGE检测表达情况,重组质粒pETMPB83在30kDa处有一特异表达带,与预计大小相符。经Ni柱纯化后,Westernblot检测纯化蛋白具有免疫活性,用纯化的该蛋白进行动物(兔)接种制备抗血清,用Westernblot和ELISA检测该抗血清的效价和特异性,结果表明特异性较好。

分类号： S852.61

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