牛早幼粒细胞白血病蛋白的原核表达及单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 程晶

作者： 程晶;陈沛霖;郭禹;崔锦蔷;江波;周林宜;刘文晓;李焕荣;李永清

作者机构：

关键词： 牛早幼粒细胞白血病蛋白;原核表达;蛋白纯化;单克隆抗体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2024 年 51 卷 009 期

页码： 4014-4024

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]牛早幼粒细胞白血病蛋白(promyelocytic leukemia protein,PMIL)是细胞核亚结构PML核体(nuclear bodies,NBs)的骨架蛋白,在抗病毒内源性免疫中发挥重要作用.本研究旨在制备牛PML单克隆抗体,为研究PML NBs结构和功能准备物质材料.[方法]构建表达bPML基因截短体的重组质粒pET-32a-bPML,将重组质粒转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析.将经镍柱亲和层析纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,应用ELISA方法鉴定单克隆抗体类/亚类和型,进一步鉴定该单克隆抗体识别的抗原表位;通过检测不同种属来源的细胞检测单克隆抗体的特异性;利用该单克隆抗体对外源转染牛PML的细胞进行Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测;利用该单克隆抗体建立的IFA检测不同的牛源细胞内源PML定位情况.[结果]牛PML在大肠杆菌中可溶性表达,分子质量大小为50 ku;以此纯化蛋白为免疫原制备出1株抗牛PML单克隆抗体bPML-2G5,其为IgG1亚类,轻链为Kappa型,识别表位位于牛PML结构域78 EQPRPSTSRA88;Western blotting和IFA分析结果显示,bPML-2G5不仅可特异性识别外源转染的牛PML,而且还能特异性识别牛肾细胞、牛鼻甲骨细胞、牛胚气管细胞的胞核内核体结构中的PML.[结论]本研究成功制备了1株分泌牛PML单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体可用于检测外源性及内源性表达的牛PML.

分类号： S852.4

  • 相关文献

[1]伪狂犬病病毒被膜蛋白pUL11和pUL16单克隆抗体的制备及初步应用. 朱婧,史智宾,杨德成,王铭,李嘉琦,王鹏飞,王靖飞. 2022

[2]马MAVS MAb的制备及其应用于EIAV感染机制的初步研究. 孙克会,王欣慧,陈克伟,杨光璞,王晓钧,杜承,郝力力. 2022

[3]2型猪链球菌SsU05-0474的表达纯化及单克隆抗体制备. 杨宝玲,陈福广,谢芳,刘思国,沈国顺,张跃灵. 2016

[4]小麦TaPDK基因的序列分析、原核表达及纯化. 杨书玲,张龙雨,张改生,桑青,刘红占,朱启迪,张新钵,赵新亮. 2013

[5]Carboxin抗性基因(Cbx~R)原核表达及多克隆抗体的制备. 李小宇,张正坤,王秋华,张春雨,张淋淋. 2015

[6]棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的原核表达及蛋白纯化鉴定. 李波,倪志勇,石庆华,范玲. 2010

[7]鸡补体C3d抗血清的制备与应用. 闫敏鑫,黄秀芬,任慧英,刘杉杉,姜良,李永清. 2015

[8]小麦热激蛋白WHSP90基因的原核表达及多克隆抗体制备. 李琳,徐兆师,刘丽,于卓,李连城,陈明,马有志. 2009

[9]口蹄疫病毒3B蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备. 辛旭,吴香菊,齐静,王永志,李相安,杜正国,单虎,杜以军. 2021

[10]猪轮状病毒NJ2012株VP8基因序列分析及原核表达. 常新见,周金柱,范宝超,郭容利,朱琳,赵永祥,牛家强,何孔旺,李彬. 2020

[11]水稻组氨酸磷酸转运蛋白OsAHP2的表达及纯化. 孙丽静,李倩影,王培楠,孙颖. 2020

[12]烟草花叶病毒P54基因的原核表达与蛋白纯化. 李聪,田培洁,张宇,张德咏,刘勇,张松柏. 2021

[13]烟草NteIF2α的原核表达、纯化及多克隆抗体制备和应用. 陈德鑫,李雯雯,李思斌,李宁,郭豪,龙月,杨永霞,贾红昉,张洪映. 2017

[14]N-豆蔻酰基转移酶在大肠埃希氏菌中的表达、纯化及活性检测. 王苗苗,董虎,卢渊录,郭慧琛,孙世琪,闻晓波. 2021

[15]人7型腺病毒Hexon蛋白原核表达及蛋白纯化. 方瑞康,肖妍,李菁菁,金宁一,鲁会军,李一权,高旭,韩继成. 2024

[16]草胺膦抗性基因bar的原核表达与蛋白质纯化. 薄慧杰,卢长明,吴刚,武玉花,肖玲,白延红,陈耀锋. 2007

[17]口蹄疫病毒3D蛋白C端Th表位的重组表达及免疫功能鉴定. 王世红,张改平,卢清侠,金前跃,刘畅,常咏哲,王爱萍. 2013

[18]猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ主要抗原表位区原核表达及其间接ELISA方法的建立(英文). 吴东,倪艳秀,何孔旺,李郁. 2014

[19]家兔早孕因子原核表达及重组蛋白的纯化、复性与鉴定. 杨杰,张海涛,翟频,白文霞,潘孝青,邵乐. 2011

[20]创伤弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆与表达. 李素一,吴唯维,李盼,柯翎,许斌福,林晨韬,林天龙,陈叙. 2013

作者其他论文 更多>>

微信小程序