猪睾丸ACE启动子驱动的SPAG6 shRNA真核表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张燕迪

作者： 张燕迪;顾涛涛;任红艳;毕延震;方桂杰

作者机构：

关键词： SPAG6;ACE;siRNA;shRNA;基因表达

期刊名称： 中国畜牧杂志

ISSN： 0258-7033

年卷期： 2024 年 003 期

页码： 224-230

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本文旨在研究猪睾丸ACE启动子驱动的SPAG6 shRNA在猪睾丸支持细胞（ST）中的干扰作用。利用PCR法从ST细胞基因组中扩增猪睾丸ACE启动子，构建重组质粒ACE-pIRES2-DsRed、ACE-pGL3-basic，通过红色荧光蛋白表达和双荧光素酶报告基因检测试验检测猪睾丸ACE启动子在ST细胞中的转录活性；根据SPAG6 mRNA靶序列设计合成3条siRNA序列，通过脂质体转染至ST细胞，利用实时荧光定量PCR及Western Blot检测siRNA的干扰效率；基于人miR-30a结构设计SPAG6 shRNA，构建重组载体ACE-sh-SPAG6-pcDNA3.1,Western Blot检测其对SPAG6的干扰效果。结果表明，成功构建重组质粒ACEpIRES2-DsRed、ACE-pGL3-basic，并证明猪睾丸ACE启动子在ST细胞中具有较强的转录活性；各试验组均能对靶基因SPAG6 mRNA的表达产生抑制作用，以siRNA-3的作用最佳。siRNA-3转染48 h后，SPAG6蛋白表达量显著下降（P＜0.001），成功筛选出SPAG6基因的最佳干扰序列；成功构建重组质粒ACE-shSPAG6-pcDNA3.1，转染ST细胞48h后SPAG6蛋白表达量较阴性对照组显著下调（P＜0.001）。本研究成功构建了猪睾丸ACE启动子驱动的SPAG6 shRNA真核表达载体，并在ST细胞中验证了其具有较好的干扰效果。

分类号： Q78

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