猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张景连

作者： 张景连;李本强;陶洁;石迎;程靖华;乔长涛;刘惠莉

作者机构：

关键词： 猪德尔塔冠状病毒;N基因;荧光定量PCR

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年 52 卷 003 期

页码： 298-303

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)作为一种新型的猪肠道腹泻病毒,建立快速有效的检测手段十分必要.本研究根据PDCoV N基因中的保守序列设计了 1对特异性引物,PCR扩增后克隆至pEASY-Blunt Zero载体,构建了阳性质粒pEASY-PDCoV/N.以阳性质粒pEASY-PDCoV/N为模板,建立了检测PDCoV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,并对其敏感性、特异性和重复性等进行了优化与验证.结果显示,Ct值与标准模板在5.83×107~5.83×101 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数(R2)为0.999,线性方程的斜率为-3.323,最低检测限度为5.83×101 copies/μL.该方法特异性和重复性均较好,对PEDV、PRV、TGEV等病毒均未出现检测信号,批内和批间变异系数分别小于1%和2%.利用建立的PDCoV荧光定量PCR检测方法对60份猪腹泻样品进行核酸检测,阳性率为18.3%,比普通PCR检出率高6.7%.结果表明,该方法可适用于临床快速检测PDCoV,为该病的预防和控制提供技术支持.

分类号： S852.659.6

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