抗黄矮病小麦-中间偃麦草易位系基因组可转化人工染色体文库的构建及初步筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王晓萍

作者： 王晓萍;张增艳;张群宇;刘耀光;辛志勇

作者机构：

关键词： 小麦;黄矮病抗性;可转化人工染色体(TAC);文库;SCAR

期刊名称： 遗传学报

ISSN： 0379-4172

年卷期： 2002 年 29 卷 08 期

页码： 712-718

收录情况： SCI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用抗黄矮病小麦 -中间偃麦草易位系HW6 4 2的细胞核DNA构建了一个可转化人工染色体 (transformation competentartificialchromosome,TAC)文库 ,文库由 2 .3× 10 6 克隆构成 ,重组率为 90 .4 8% ,平均插入片段大小为 2 2kb左右 ,约覆盖普通小麦单倍体基因组 2 .5倍 ,在该文库中分离得到单拷贝DNA序列的几率约是 95 .77%。文库保存在 2 4块 96孔板中 ,每个孔中约含有 10 0 0个不同的重组克隆 ,可以采用PooledPCR的方法对文库进行筛选。用来源于小麦的简单重复序列 (simplesequencerepeat,SSR)引物wms37扩增中间偃麦草、抗病易位系及感病材料 ,得到一条与抗性共分离的特异条带 ,约 4 5 0bp。将此特异标记条带转化为SCAR(sequencecharacterizedamplifiedregion)标记 ,用于筛选HW6 4 2基因组TAC文库 ,得到 12个阳性克隆。对阳性克隆进行了PCR Southern验证 ,以中间偃麦草基因组总DNA为探针与限制酶HindⅢ消化后的阳性克隆杂交 ,其中 10个阳性克隆分别有 1～ 6条杂交带 ,结果表明 ,这 10个阳性克隆可作为抗黄矮病相关基因筛选的候选克隆

分类号： Q943.2

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