茶树CsSMT基因的克隆、原核表达及植物超表达载体构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘声传

作者： 刘声传;鄢东海;周雪;曹雨;莫雪;胡伊然;周玉锋

作者机构：

关键词： 茶树;硒;Cs SMT;原核表达;超表达

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 2016 年 29 卷 07 期

页码： 1540-1546

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了发掘利用茶树(Camellia sinensis)富硒关键酶硒代半胱氨酸甲基转移酶(Selenocysteine methyltransferase,SMT)基因Cs SMT,基于宁州2号转录组测序结果,通过RACE克隆该基因的c DNA全长,并通过原核表达和蛋白质印迹(Western blotting)验证该基因,然后构建超表达载体,转化至根癌农杆菌。结果表明:该基因c DNA全长为1277 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为1 050 bp,与NCBI公布的茶树该基因ORF序列有8个点突变,且缺少GTCGTC序列。Cs SMT基因编码349个氨基酸,其氨基酸序列与毛果杨、野生大豆、黄芪的SMT以及川桑的同型半胱氨酸-S-甲基转移酶2(Homocysteine-S-methyltransferase 2,HMT2)的氨基酸序列有较高的相似性。目标蛋白分子量约38 k Da,为水溶性蛋白,与预测结果相符。成功构建Cs SMT基因的超表达载体,并获得携带Cs SMT的农杆菌菌株。

分类号： S571.1

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