基于量子点微球和RPA技术的ASFV抗体-核酸快速现场联检方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵伊然

作者： 赵伊然;单衍可;李嘉豪;何昭群;王欣艺;温墩;王米拉;储蕊;赵东明;刘斐

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟;核酸检测;抗体检测;侧向流免疫试纸条

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2024 年 57 卷 024 期

页码： 4990-5002

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】非洲猪瘟（African swine fever,ASF）作为世界动物卫生组织（world organization for animal health,WOAH）规定必须通报的疫病之一，同时也是我国一类动物疫病，因缺乏有效疫苗和治疗方法，早期、有效、快速和敏感的检测对防控ASF至关重要。目前，非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）常用临床检测方法主要包括荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)、酶联免疫吸附测定试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）等，但这些技术均需要复杂的操作、昂贵的仪器以及较长的检测时间，不适用于现场快速检测。此外，ASFV感染后宿主体内的抗体和核酸含量在不同时间段有明显的差异，因此单独检测ASFV核酸或抗体可能会导致假阴性的存在。【目的】通过研发一种基于量子点微球和重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification,RPA）的ASFV抗体-核酸联检试纸条，实现ASFV抗体和核酸的现场同时检测，以提高检测的灵敏度、特异性，降低检测成本，节约检测时间。【方法】通过结合量子点荧光免疫层析技术及RPA技术建立了同时检测ASFV抗体及核酸的侧向流层析试纸条，配套便携式荧光分析仪可实现ASFV抗体-核酸的快速现场联检。本研究优化了量子点偶联蛋白量及检测线包被浓度等条件。在此基础上，确定了该检测方法的cutoff值、敏感性、特异性及重复性，并将所建立的ASFV联检试纸条与市售ELISA试剂盒、qPCR检测试剂盒对临床样品进行检测，比较检测结果，验证该方法的符合率，评价该试纸条的实用性。【结果】联检试纸条使用方便、快速，整个检测过程可在30 min内完成。且与其他6种常见猪传染性病毒之间不存在交叉反应，特异性良好。核酸检测灵敏度可达10 copies/μL，抗体检测灵敏度可达1:3 200。抗体和核酸检测批内变异系数均小于10%，批间变异系数均小于15%，重复性良好。经市售ELISA试剂盒、qPCR试剂盒分别验证，符合率均为100%。除此之外，在临床样品检测中发现，有2份抗体检测阳性的样品其对应的猪只核酸检测为阴性，且这2头猪无明显临床症状，该结果进一步证明了通过抗体和核酸联检能够提高检测的准确性，减少假阴性的存在。【结论】核酸-抗体联检单次试验成本与病原核酸抗体分别检测总成本相比有所降低，节约了检测成本和时间，对于ASF急性发作、慢性感染检测均敏感，避免了仅检测单个核酸或单个抗体的局限性。此方法对操作环境要求低，使用的荧光分析仪便于携带，易于操作，整个操作过程无需过多昂贵的实验仪器和专业技术人员，降低了对检测设备的精密要求，适用在偏远地区以及基层中开展ASFV检测工作。因此，该方法有望成为未来猪场ASFV即时检测的可靠方法。

分类号： S858.28

  • 相关文献

[1]小反刍兽疫检测方法的研究进展. 李静,刘振东,孙跃峰,窦永喜. 2023

[2]胶体金检测试纸卡在检测非洲猪瘟病毒抗体上的应用. 张元峰,刘锡玲,毕路,李佳,方瑞,李乾,赵俊龙,毕丁仁,黄丽,步志高,翁长江. 2020

[3]非洲猪瘟病毒p30抗体竞争化学发光法的建立. 温升辉,邵军军,高闪电,彭德财,常惠芸,丁嘉烽,刘伟,师铭咸. 2025

[4]快速检测小反刍兽疫病毒RT-LAMP方法的建立. 李伟,李刚,范晓娟,张坤,贾风琴,史利军,Hermann Unger. 2009

[5]2014年重庆地区星状病毒、札如病毒、腺病毒致儿童急性腹泻流行特点. 陈婉冰,余凤,乔英琴,许红梅. 2016

[6]食品中诺如病毒检测技术研究进展. 廖小艳,陈丽丽,白亚龙. 2021

[7]重组酶聚合酶扩增技术的研究进展及其应用. 杜亚楠,赵笑,范小瑞,张琪,赵凯,许燕. 2018

[8]核酸检测在猪病检测中的常见问题与分析. 孙华伟,郭静,张敬峰,李彬,张小飞. 2020

[9]基于CRISPR/Cas13的RNA编辑系统及其在核酸检测中的应用. 张爱霞,朱庆锋,陈沛,于洋,魏文康,晏石娟,刘文华. 2020

[10]成环恒温扩增法的发展及应用. 刘志杰,侯俊玲,关贵全,罗建勋,殷宏. 2008

[11]基于RPA技术对转CP4-EPSPS基因产品的快速检测. 胡秀文,邓波,王金斌,刘华,唐雪明,王宇,曾海娟,蒋玮,李红. 2023

[12]青海地区牦牛牛支原体核酸检测分析. 王方国,陈胜利,颜新敏,郝华芳,兰仕梅,李章程,马丽娜,储岳峰,曹随忠. 2022

[13]小反刍兽疫病毒RT-LAMP快速检测方法的建立. 李伟,李刚,范晓娟,张坤,贾风琴,史利军,HermannUnger. 2009

[14]核酸检测技术在水产养殖病原诊断中的应用. 范文辉,黄倢,包振民. 2005

[15]非洲猪瘟病毒核酸可视化检测方法的建立与评价. 刘星岐,白玉洁,张梦瑶,黄静波,刘光亮,李媛媛,谭树义,张海丽,张艳,曹宗喜,王化磊,黄培. 2024

[16]我国羊泰勒虫病快速诊断方法成环恒温扩增法的研制. 刘志杰,侯俊玲,MohammedA.Bakheit,DiaeldinA.salih,罗建勋,殷宏,JabbarS.Ahmed,UlrikeSeitzer. 2009

[17]基于表面等离子体共振的核酸传感器研究进展. 安娜,郑子繁,董美,刘卫晓,宛煜嵩,金芜军,李亮,韩阳. 2019

[18]CRISPR-Cas系统在核酸检测中的应用研究. 胡秀文,刘华,王宇,唐雪明,王金斌,曾海娟,蒋玮,李红. 2021

[19]犬副流感病毒反转录-环介导等温扩增检测方法的建立. 王凤雪,程世鹏,温永俊. 2016

[20]基于酶促重组酶扩增的非洲猪瘟病毒检测方法. 冯露,田宏,郑海学,石正旺,罗俊聪,张晓阳,尉娟娟,周静,廖焕程,王婉莹. 2024

作者其他论文 更多>>

微信小程序