毕赤酵母组成型高效表达启动子的筛选鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 石义超

作者： 石义超;王凤忠;江均平;朱利泉

作者机构：

关键词： 葡萄糖氧化酶;巴氏毕赤酵母;启动子pGCW14;组成型表达

期刊名称： 食品工业科技

ISSN： 1002-0306

年卷期： 2018 年 13 期

页码： 110-116

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得高产量、高活性的葡萄糖氧化酶(GOD)酵母表达菌株,优化了GOD的T132S/T56V双突变编码序列,将之克隆到表达载体p GAP_k上得到表达载体p GAP_k-h_2-GOD,以p GAP启动GOD基因的表达。将p GAP_k-h_2-GOD上的p GAP启动子替换为p GCW14和p AOX1,并对p GCW14启动子进行改造,得到3种p GCW14的改造体,最终得到包括p GAP_k-h_2-GOD在内的6种不同启动子的重组表达载体。将这6种载体转化毕赤酵母GS115,建立了一种简便高效的筛选方法初步筛选出GOD重组菌株,再对筛选到的转化子进行发酵培养,测定发酵上清液的GOD酶活力,以此来比较各种启动子启动效率的强弱。结果显示:p GCW14的启动效率是p GAP的3~5倍,改造后的启动子p GCW14+G20A/C-467T(0.767)和p GCW14-UA(0.689)的启动效率较原始的p GCW14(0.574)都有明显的提高,尤其p GCW14+G20A/C-467T启动效率最高,比原始p GCW14提高了32.5%左右。与诱导型启动子p AOX1(1.187)相比,p GCW14+G20A/C-467T(1.109)的启动效率仅比其低6.6%左右。结论:改造后的启动子可望在毕赤酵母组成型高效表达的研究应用中具有一定的前景。

分类号： Q78

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