大肠杆菌多酚氧化酶的分子克隆及异源高效表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 邓卉

作者： 邓卉;余丹;邹成义;范景胜;李斌;屈东;倪青松;郑钰嘉;陈瑾

作者机构：

关键词： 大肠杆菌;多酚氧化酶;克隆;高效表达

期刊名称： 中国饲料

ISSN： 1004-3314

年卷期： 2024 年 005 期

页码： 26-31

收录情况： 北大核心

摘要： 菜籽粕、棉籽粕等非粮饲料资源存在的酚类化合物芥子碱、棉酚等抗营养因子，严重影响了其饲喂价值。本课题组筛选出的一株大肠杆菌属芥子碱降解菌SDB2已被证实能通过分泌多酚氧化酶来降解芥子碱和棉酚，本试验旨在运用基因工程技术克隆SDB2多酚氧化酶基因，实现其高效表达，为SDB2多酚氧化酶在饲料工业上的规模化应用奠定基础。从大肠杆菌SDB2中克隆出多酚氧化酶基因，将其与质粒pET28a连接后转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中培养，通过PCR鉴定及质粒酶切验证方法构建重组菌株，同时对重组克隆基因进行生物信息学分析。采用“2×2”交叉试验设计，以温度和诱导剂IPTG浓度两个影响因素诱导SDB2多酚氧化酶基因在重组菌株中高效表达，经SDS-PAGE和WB双重验证后，确立最佳诱导条件，最终纯化出目标酶蛋白。结果表明：（1）成功克隆SDB2多酚氧化酶基因，构建出异源表达重组菌株。（2）克隆出的SDB2重组多酚氧化酶基因含目标核苷酸741个，总编码氨基酸263个（含标签氨基酸20个），氨基酸组成的蛋白相对分子质量为28499.0，理论等电点为6.94，据此预测出SDB2重组多酚氧化酶三维结构模型。（3）确立SDB2多酚氧化酶异源高效表达的最佳诱导条件为温度37℃，IPTG浓度1 mmol，该条件下表达出大量可溶性酶蛋白，有利于工业化生产。本试验条件下，大肠杆菌SDB2多酚氧化酶成功实现了分子克隆及异源高效表达，为我国非粮饲料资源实现高效利用提供了技术参考。

分类号： S816.3

  • 相关文献

[1]番鸭呼肠孤病毒MW97106C蛋白基因克隆及其在E.coli中表达. 张云,欧阳岁东,刘明,胡奇林,韩周,林锋强. 2005

[2]重组犬IL-2在原核细胞中的高效表达. 张海峰,李景荣,唐丽杰,李一经. 2006

[3]甘薯多酚氧化酶保守区的cDNA克隆及序列分析. 彭世清. 2000

[4]香蕉PPO基因的克隆及原核表达. 陈娇,袁德保,谭琳,杨昭,李奕星,王朝政,李芬芳,仇厚援,陈文学. 2015

[5]芒果果实多酚氧化酶(PPO)基因的克隆与表达分析. 魏婷婷,赵志常,汪自松,黄团,刘彩华,罗睿雄,高爱平. 2023

[6]纳豆激酶的克隆及在大肠杆菌中的表达. 李敏,陈柳萌,张诚,曾小军,刘芬,陈时建,李文婧,罗武. 2012

[7]大肠杆海藻糖磷酸合酶基因的克隆. 王自章,张树珍. 2002

[8]耐盐基因HAL1的克隆及在原核细胞中的表达. 于志晶,韦正乙,卢东长城,蔡勤安,侯敬尧,邢少辰. 2008

[9]含XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1重组菌B-pGp1表达条件的研究. 冯蕾,古丽努尔,杨新平. 2005

[10]大肠杆菌植酸酶appA基因的克隆、表达及性质分析. 冉瑞法,刘淑娟,肖圣燕,冯蔚,李镇刚. 2017

[11]大肠杆菌海藻糖磷酸合酶基因的克隆. 张树珍,李杨瑞. 2002

[12]嗜水气单胞菌溶血素A表达、免疫原性及活性检测. 赵秀敏,高勤学,陈鸿军,韩先干,丁铲. 2011

[13]鸡败血支原体GapA高变区在大肠杆菌中高效表达. 赵春梅,陈鸿军,宋翠萍,于圣青,丁铲. 2009

[14]来源于Escherichiacoli的高比活植酸酶基因的高效表达. 罗会颖,姚斌,袁铁铮,王亚茹,史秀云,伍宁丰,范云六. 2004

[15]来源于Selenomonas ruminantium的高比活植酸酶基因在毕赤酵母中的高效表达. 王亚茹,姚斌,罗会颖,袁铁铮,都占魁,史秀云,伍宁丰,范云六. 2004

[16]来源于Bacillus subtilis的中性植酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达. 姚斌,袁铁铮,王元火,操时树,王亚茹,史秀云,范云六. 2001

[17]aurT基因对金褐霉素生物合成的调控 及其作用机制. 魏杰,于文辰,郝若冰,杨静,许德鑫,高军. 2021

[18]饲料用酶制剂的研究进展与趋势. 杨培龙,姚斌. 2009

[19]茶树脂氧合酶(Cslox1)在酵母中的高效表达及酶学特性研究. 刘守安,韩宝瑜. 2009

[20]鸡β2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化. 刘光亮,童铁钢,孟庆文,吴东来. 2006

作者其他论文 更多>>

微信小程序